补肾抗衰片含药血清对体外培养日本大耳白兔内皮细胞HO-1水平的不同效应研究.pdfVIP

可能在肿瘤MDR的发生过程中起重要作用。肿瘤细胞的抗凋亡作用是通过一系列凋亡调节蛋 抵抗凋亡的能力增强，比值低时则细胞趋于凋亡。己知抗凋亡蛋白Bc卜xL的高表达是 ¨“。有研究显示蟾毒灵能抑制子宫内膜异位囊肿基质细胞ECSC的DNA合成，并诱导细胞凋亡， 级联反应发挥诱导细胞凋亡的作用“…。我们的研究也发现0．01uM以上的蟾毒灵能显著下调 Bc卜xL、上调Bax表达，改变耐药细胞线粒体依赖性凋亡途径上Bcl—xL／Bax蛋白的比值。提 示激活Bcl一2家族介导的受抑制的细胞凋亡通路与蟾毒灵逆转K562／VCR细胞多药耐药的机 制可能有关。 53．补肾抗衰片含药血清对体外培养日本大耳白兔 内皮细胞HO-1水平的不同效应研究 张光银张军平 丁义曹阳李光辉 1．．天津中医药大学天津300193 2．天津中医药大学第一附属医院天津300193 摘要：目的探讨血红素氧合酶一1(HO一1)在体外培养日本大耳白兔内皮细胞中的作用范围以 及补肾抗衰片含药血清的干预效应。方法分离培养乳兔主动脉内皮细胞，MTT法分析补肾 抗衰片不同浓度含药血清对内皮细胞的影响，寻找最佳含药浓度。预先通过不同浓度的Ho_1 激动剂Hemin和H0_1抑制剂Znpp分别处理兔主动脉内皮细胞，预处理24h后以最佳浓度补 肾抗衰片含药血清干预72h，以酶联免疫法分析H0-1水平。结果MTT法显示10％含药血清 对内皮细胞具有最佳作用，补肾抗衰片含药血清对lumol／L、lOumol／LHemin孵育后的内皮 细胞H旷1水平具有明显的抑制作用(PO．05)，对lumol／L、lOumol／LZnpp孵育后的内皮细 胞H旷l水平没有明显的影响，但补肾抗衰片含药血清明显上调了lOOumol／LZnpp孵育后的 抑制效应，而对抑制剂Znpp孵育后的内皮细胞H0_l水平呈促进效应。其调节H沪1水平可 能是实现保护主动脉内皮功能的途径之一。 关键词：补肾抗衰片；含药血清；血红素氧合酶一1；内皮细胞 示，氧化应激在血管病变，尤其是As过程中扮演着重要角色。AS发生时，体内一系列保护 机制被激活，血红素氧合酶(Heme oxygenase，HO)就是这种保护性蛋白之一。Ho一1的表达 可由其底物血红素(Heme)和多种应激刺激诱导，HO一1降解血红素，生成胆红素、铁和CO， 一方面限制血红素对机体的有害作用。另一方面其代谢产物胆红素、铁和C0在体内均有重 要的生理作用n。川。 本研究分离乳兔主动脉内皮细胞，以补肾抗衰片不同浓度含药血清培养内皮细胞，寻找 动脉内皮细胞，预处理24h后以最佳浓度补肾抗衰片含药血清干预72h，分析Ho-l水平， 探讨补肾抗衰片含药血清对不同浓度Hemin、Znpp孵育后内皮细胞的抗氧化保护效应。 195 1．材料与方法 1．1材料 1．1．1动物与细胞 普通级雄性日本大耳白兔1只，体重2．5kg；清洁级1周龄日本大耳白兔2只，雌雄不限， 均购自北京市维通利华实验动物中心。日本大耳白兔主动脉内皮细胞为原代培养。实验过程 中对动物处置符合2006年科学技术部发布的《关于善待实验动物的指导性意见》。 1．1．2试剂与仪器 补肾抗衰片由茯苓、党参、龟甲、杜仲等组成，津药制字(天津中医药大 学第一附属医院)；DM肼、胎牛血清和其他细胞培养试剂(天津灏洋生物制品有限公司)；H沪1 型胶原酶、Ⅳ型胶原酶、V型胶原酶、血管内皮生长因子(VEGF)、碱性成纤维细胞生长因子 PowerShot A640)、COt培养箱、 (bFGF)(sigma)；倒置相差显微镜(OLYMPUS)、相机(Canon 酶标仪(MultiskanMK3)。 1．2方法 1．2．1补肾抗衰片含药血清制备 普通级雄性日本大耳白兔，予补肾抗衰片lg／kg每曰2次，每克以蒸馏水5ml溶解给药， 连续给药3d，末次给药后1h心脏采血。按通法方案制备含药血清【3叫1，用0．22Lm的微 孔滤膜过滤除菌，置一20℃保存备用。 1．2．2兔内皮细胞原代培养 1周龄日本大耳白兔放入标本缸，加入lml乙醚，麻醉lmin后