2014年第一讲 酶和酶工程及其应用.pptVIP

如果能赋予抗体以酶的催化活性，则无疑可使酶的品种极大地拓展，其前途和效应不可估量。 那么，能否把抗体变为有催化能力的酶呢? 抗体酶设计的主要依据： 1946年，Pauling用过渡态理论阐明了酶催化的实质，后经过Jencks等人的探索发现过渡态分子难以捕获，而过渡态类似物则是能够模拟酶催化反应过渡态结构的稳定物质； Kohler和Milstein于1975年发明了具有历史意义的单克隆技术，使抗体酶的生产成为可能； Lerner和Schultz分别证明了针对羧酸酯水解的过渡态类似物产生的抗体，能催化相应的羧酸酯和碳酸酯的水解反应。1986年美国“Science”杂志同时发表他们的发现并将这类具有催化能力免疫球蛋白称抗体酶(abzyme)或催化抗体(catalyticantibody)。 5）分子印迹技术 用过渡态类似物在高分子基质上构筑识别、结合、催化底物的洞穴的方法。 哮喘病人血清IgG中存在能够特异性水解神经递质血管肠肽(VIP)的催化抗体； 桥本甲状腺炎和系统性红斑狼疮(SLE)病人血清IgG中存在水解甲状腺素前体甲状腺球蛋白(Tg)的抗体酶以及水解DNA和RNA的抗体； 多发性骨髓瘤病人身上分离出的免疫球蛋白轻链具有凝血酶原酶的活性； 严重的血友病患者血清中有能裂解凝血因子Ⅷ的自身抗体； 讨论： 提高抗体酶的催化效率的手段有哪些？ 改进半抗原设计 随机突变 DNA改组技术(DNA shuffling) 三、抗体酶的研究展望 抗体酶的研究吸引了化学家、生物学家、免疫学家及酶学研究者的格外关注，是当今科学前沿多学科研究的交叉领域，它突破了传统的胶束、配位化合物、印迹分子等模拟酶的框架，开辟了崭新的模拟酶研究方向和催化剂研究的新领域，无论是在理论探索方面或是在实际应用方面都已显示出潜在的应用价值。 （2）肽合成酶的模拟 Sasaki合成了冠醚化合物模拟肽合成酶，该化合物含有一个结合位点和两个反应部位。冠醚环结合质子化的a-氨基酸对硝基苯酯分子，形成非共价配合物，由于-SH的进攻，催化水解释放出对硝基酚，生成双硫酯。由于底物分子相互靠近，容易发生分子内催化反应，即酰基转移形成肽键，再生成巯基，重复以上反应可以延长肽链。 二、抗体酶的应用 1、有机合成手性药物拆分 2、在临床医学上的应用 1、有机合成手性药物拆分 目前世界上在1327种全合成的化学药物中约有五百多种手性药物，其中只有10％为单一对映体药物。手性药物应该是指只含有单一对映体的药物，但过去手性药物多数以其消旋体形式出售。对映体药物由于性质上的相似而成拆分的难题。 使用抗体酶进行化学和药物合成的优势在于抗体酶反应的特异性，因此可以用抗体酶来合成手性药物或者进行外消旋体的拆分，而得到手性的产物一直是药物研究的方向。 利用对映体专一性脂肪酶能拆分外消旋醇混合物 2、在临床医学上的应用 抗体酶药物前体治疗技术： (antibody-diretted abzyme prodrug therapy，ADAPT) 将能水解前药释放出肿瘤细胞毒剂的酶和肿瘤专一性抗体相偶联，这样酶就会通过和肿瘤结合的抗体而存在于细胞的表面。静脉给药后，当药物扩散至肿瘤细胞的表面或附近时，抗体酶就会将前药迅速水解释放出抗肿瘤药物，从而提高肿瘤细胞局部药物浓度，增强对肿瘤的杀伤力，达到提高肿瘤化疗效果的目的。ADAPT技术减轻了对正常组织细胞的损害，实际上是生物导弹技术的发展。 （1）治疗肿瘤 （2）用胰岛素前药治疗糖尿病 将胰岛素用一定的化学基团修饰后转变成无活性的前药，而后在抗体酶38C2的催化下可转变成有活性的胰岛素，动物实验证实这种前药释放系统可以将低血糖的时间t1/2延长到30h，而天然的胰岛素所维持的低血糖时间t1/2仅为8h左右。 （3）戒毒 用可卡因水解的过渡态类似物-磷酸单酯为半抗原，产生的单克隆抗体能催化可卡因的分解，水解后的可卡因片断失去可卡因刺激功能。 （4）治疗HIV及其他慢性病毒病 开辟新的抗病毒治疗手段通过被感染的细胞表面表达具有靶标的病毒蛋白用ADAPT方法治疗HIV 内毒素脂多糖靶标治疗革兰阴性菌引起的败血症 纠正先天性代谢疾病如重症综合免疫缺陷(缺乏ADA) 军队利用抗体酶水解特性来解神经毒对抗化学武器 （1）将催化水解反应的抗体酶研究深入下去极有可能得到一种新型的蛋白酶，按照人们的意愿对特定的肽键进行水解。可利用抗体酶专一破坏病毒蛋白质及专一清除体内“垃圾”。 （2）进一步拓宽催化反应范围，其中包括天然酶不能催化的反应以及通过其他方法难以实现催化的化学反应。抗体酶可以解决外消旋混合物的对映体拆分问题。美国IGEN公司已将具有酯解活力的抗体酶应用于生物传感器的制造上。 （3）可以指导寻找一些未知的酶。已知有些反应