34、氯及铁的测定.pptVIP

实验九 硫氰酸汞比色法测定血清氯亚铁嗪比色法测定血清铁和总铁结合力 【目的要求】 1、? 掌握硫氰酸汞比色法测定血清氯化物的原理。 2、 掌握亚铁嗪比色法测定血清铁和总铁结合力原理。 【实验原理】 血清氯化物的氯离子与未解离的硫氰酸汞溶液混合时，氯离子首先与汞结合形成难以解离的氯化汞，并释放相应的硫氰酸离子，此离子与试剂中的铁离子结合，生成红色的硫氰酸铁，其色泽与氯的含量呈正比。 【实验操作】取试管4支 加入物 试剂空白管 标准管 测定空白管 测定管 血清 0. 1 0.1 氯标准液 0.1 空白试剂 3.0 显色应用液 3.0 3.0 3.0 混匀，置室温10min,以试剂空白管调零，在460nm波长处比色，分别读取各管的吸光度。 【计算】 氯化物（mmol/L）=（A测-A测定空白）/A标*100 【参考范围】血清氯化物 96-108 mmol/L 脑脊液氯化物 120-132 mmol/L 尿液氯化物 170-250 mmol/L 【注意事项】 1、此法对其他卤族元素也防身同样的呈色反应。但在正常人血液中上述元素含量低，可忽略不计。 2、显色液的呈色强度与硫氰酸汞和硝酸汞的含量有关。如呈色过强，线性范围在125mmol/L以下，增加硝酸汞的用量；呈色太弱，增加硫氰酸汞的用量，使用前二者进行调整，使其色泽在460nm波长，10cm光径比色杯测定，吸光度在0.4左右为宜。 3、本法校正曲线不经过原点，但汞离子调控适当，在70-140mmol/L范围线性良好。 4、本法呈色温度应不低于20度，室温过低易产生浑浊，影响比色。 5、可用于自动生化分析仪。 6、每批标本测定，应同时测定正常和异常值得质控血清，所得值应该在允许误差范围内，否则应查找原因。 【评价】线性范围 75-125mmol/L 显色稳定性 2h内呈色稳定 干扰试验 胆红素达到225.7umol/L，结果增加2.9%，Hb达到5g/L，结果增加3.3%，β-脂蛋白达到15.94g/L和17.0g/L时，结果分别增加4.3%和7.8%。 亚铁嗪比色法测定血清铁和总铁结合力 【原理】血清中的铁与运铁蛋白结合成复合物，在酸性介质中铁从复合物中解离出来，被还原成二价铁，在于亚铁嗪直接作用生成紫红色复合物，与同样处理的铁标准液比较，求得血清铁含量。 总铁结合力（TIBC）是指血清中的运铁蛋白能与铁结合的总量。将过量铁标准液加到血清中，使之与未带铁的运铁蛋白结合，多余的铁被轻质碳酸镁粉吸附除去，然后测定血清中总铁含量，即总铁结合力。 【实验操作】1、血清铁测定 取试管3支 加入物 空白管 标准管 测定管 血清 0.2 铁标准液 0.2 去离子水 0.2 甘氨酸-盐酸缓冲液1.0 1.0 1.0 混匀，37度5min,于562nm波长处，以空白管调零，读取A测（血清空白） 亚铁嗪显色液(B) 0.2 0.2 0.2 混匀， 37度5min,再次读取各管吸光度。 2、血清总铁结合力测定 在试管中加入血清0.45ml，179umol/LTIBC铁标准液0.25ml及去离子水0.2ml，充分混匀，放置室温10min,加入碳酸镁粉末20mg,在10min内振摇数次，3000r/min离心10min,取上清液操作。 取试管3支 加入物 空白管 标准管 测定管 血清 0.45 铁标准液 0.45 去离子水 0.45 甘氨酸-盐酸缓冲液1.2 1.2 1.2 混匀，于562nm波长处，以空白管调零，读取A测（血清空白） 亚铁嗪显色液 0.05 0.05 0.05 混匀，放置 室温15min,再次读取各管吸光度。 【计算】血清铁（umol/L）=（