人T-bet基因转染U937探讨T-bet对白血病细胞的影响.pdfVIP

维普资讯 免 疫 学 杂 志 第23卷 第6期 2OO7年 l1月 INNUNOLOGICALJOURNALV01．23No．6Nov．2OO7 ·619 · [文章编号]1000-8861 2007 06-0619．04 人T-bet基因转染U937探讨 T．bet对自血病细胞的影响 许小朋。，王锁英 ，杨 敏。，邱谷风。，王胜军。，邵启祥。，许化溪。 江苏大学 ．检验医学研究所免疫 学研究室；b．附属医院儿科，江苏镇江212001 [摘 要] 目的 探讨人 T_ 基因在 白血病细胞株 U937中的表达及其对 IFN．7分泌的影响，寻求通过免疫调节改善白 血病患者机体免疫状态的可能性。方法 采用电穿孔技术将重组人 plRES-eGFP-Ibet plRES-eGFP-hlbet 质粒转染 U937细胞 ， RT-PCR检测转染前后 U937细胞T_bet的mRNA水平；westen—blot检测表达的T_bet蛋 白；ELISA检测其分泌 IFN．7的水平。试 验中同时设立pIRES-eGFP质粒为对照。结果 电穿孔转染U937细胞后，在荧光显微镜下观察到带荧光的细胞 转染细胞 ，其 荧光细胞阳性率80％左右，提示转染成功；转染T-bet的U937细胞 ，分别经RT-PCR及westen—blot检测到T-bet的mRNA和表达 的蛋白，而未经转染或转染对照质粒pIRES-eGFP的细胞 ，均未见目的基因的转录和蛋白表达 ；T-bet转染细胞的培养上清中含 有较高水平的 IFN．7，而转染前及对照质粒转染的细胞 IFN．7的分泌水平极低。结论 通过电穿孔方法成功将人T-bet基因转 染到白血病细胞株 U937中，并检测到大量 IFN．7的产生。T-bet是免疫应答调节的重要转录因子，对其研究将有助于进一步探 讨T_bet基因或其表达产物作为Thl应答的调节剂用于临床血液病治疗的可能性。 【关键词] 基因转染；T-bet；干扰素 7；U937 [中图分类号] 11577 [文献标识码] A Expressionandfunctionofh／ T-betrecombinationgenetran~ected-I．9／37 XUXiao—peng，WANGSuo-ying，YANGMin，QrtJGu—feng，WANGSheng-jun，SHAOQi—xiang，XUHua-xi Depart— merttofImmunology，JiangsuUinversitySchoolofmedicaltechnology，Zhenjio．ng212001，China [Abstract] Objeelive ToinvestigatetheeffectsofT-betgeneinleukermiccellonthelevelofIFN-7forseekingawayofimproving theimmune~tltteofleukemiapa~entbyimmunomodulation．Methods pIRES-eGFP-hlbetrecombinantpla~miawasestablished．andthen transfectedintoU937cellsbyusingelectroporationmethods． ehumanT-betgenew舾 amplifiedandidentifiedbyRT-PCR；theexpression proteinofT-betw舾 observedbyWesternblotting；thelevelofIFN- wasdetectedbyELISA．Results Aftertral~ection，about80％ fluores． centU937cellsweredetected．T-betmRNA andproteinwerefoundintransfectedT-betU937cellsbutnotin veand~ ectedU937 cells．ThelevelofIFN-7protein惴 obviouslyhighinT-bet-transfectedU937cellsbutwasnotobviouslydetectedin veandurdramfeeted U937cells．Conelmion HumanT-bettrai