致病性猪源肠球菌16S+rDNA-RFLP研究及系统进化分析.pdfVIP

第十三次学术研讨会会议论文集 猪霍乱沙门菌弱毒株，经广泛、长期用于预防免疫，证明弱毒株毒力稳定，没有返刮31。胞内 寄生细菌，都具有很强的侵袭性，可产生局部或全身感染，能通过粘附和侵袭等机制定居在肠相关 淋巴组织，并转移到肝和脾脏，有效地刺激机体产生保护性免疫应答反应【4】。沙门菌是一种比较严 重的消化道致病菌，不含荚膜与芽胞但有周身鞭毛的革兰氏阴性菌，其基冈组结构与大肠杆菌基本 相同，主要致病抗原是菌体(o)抗原及鞭毛(H)抗原。减毒沙门菌是经过物理、化学或基因工程 等方法，使沙门菌的某些特定基因发生不可逆的突变，使其毒性大大降低【5矧。国外学者以减毒沙门 菌，为载体在真核细胞中成功表达了一些外源基因，结果证实利用这类细菌作为载体传递外源质粒 种雏鸡，并在雏鸡体内传代接种的实验结果显示各组间体重无统计学差异(P0．05)，也无任何不 良反应，进一步证实了该减毒株具有较好的安全性。 综上所述，以减毒猪霍乱沙门氏菌C500株作为传递外源基因活载体具有良好的安全性和稳定性。 参考文献(膏) 致病性猪源肠球菌16SrDNA．RFLP研究及系统进化分析 杨霞陈陆常洪涛王新卫刘红英王川庆 (河南农业大学牧医工程学院450002) 摘要为探讨分离之河南滑县、武陟等12个地域的猪源肠球菌的亲缘关系，采用对其16srDNA基因的融玑P分析、 序列分析、及系统进化树的构建等方法，对这12株疑似猪源肠球菌进行了研究：结果显示：12株分离株均与肠球菌 同源性最高，同源率达98．1％．100％；而与猪链球菌同源率最高才达85．5％，且进化树中，12株菌株均位居与猪链球菌 并列的肠球菌主干分支中。HandⅢ，xbaI，Ec0R1分别对这12株球菌的16srDNA．褂也P分析发现，它们在该片段上 有限制性位点，但没有产生限制性片段长度多态性；而Hinn单酶切结果出现了限制性片段长度多态性，且l琳分离 株可分为两大rDNA图谱类群，与实际测序分析的酶切位点相一致，且找到鉴定肠球菌的一350bp的分子标记．说明 所分离这l琳球菌均是肠球菌，且不同地理种群已出现分化。 关犍词致编性肠球菌；ⅪLP；同源性；进化树 肠球菌是存在于人类或动物胃肠道的正常荫群，偶尔定植于口腔和阴道【l】，且广泛分布于自然 界中，已分离出至少19种基因型’2’引，是一种重要的机会致病菌。该菌由于自然寄生于动物的肠道， 常被作为一种有益菌进行研究。目前，由于抗生素的大量使用，加上免疫制剂的不合理使用等因素， 使得肠球菌的感染在医学临床中日趋严重降丌，主要表现为尿路感染、败血症、脑膜炎及肺炎等等【sJ。 在兽医临床中近年来也有动物感染的报道【9，101，且肠球菌属在兽医临诊临床标本中的分离率不断增加 【111。 疗时机，使病情得不到及时的控制。分子基因技术，如16SrDNA基因序列分析技术在随着养猪 业集约化程度的不断提高，猪病日益复杂化。猪源肠球菌虽然是健康猪只肠道内的正常菌群，但由于 抗生素的滥用等冈素导致该菌引起的感染日益增多，给畜牧业造成了很大的经济损失。目前，临床 微生物实验室对肠球菌的鉴定仍依靠表型特征的检测作为重要的鉴定方法。但由于许多肠球菌种间 的表型特征非常接近，因此要想明确鉴定需要花费数天的时间。自动化鉴定系统对一些少见菌种的 鉴定往往失败。而且可能由于判定误差不能快速正确的鉴别出猪链球菌和猪源肠球菌，以至于延误 治 21。对16s 阐明属间、菌种之间亲缘关系以及新菌种发现等方面发挥了巨大作用【l rDNAPCR产物 进行限制性片段长度多态性(Restriction．Fragment．Length 基因型信息的有效手段【1引。该研究以本实验室从不同发病猪场分离出的12株G+球菌为对象，在表型鉴 定符合肠球菌基础上，直接进行了16SrDNA一融吧P及系统进化分析研究，旨在进一步鉴定G+球菌，了 解河南省猪场G+球菌引起的感染中肠球菌引起感染的情况、菌株系统发育地位及主要基因类群的分 布差异，为今后本地猪肠球菌性疾病的诊断治疗与防控提供重要理论基础。 90l 猪的传染病