CMV甜瓜分离物外壳蛋白基因的克隆及植物表达载体的构建.pdfVIP

第 20卷第3期 中 国 病 毒 学 20(3)：307-310 2005年 6月 VIR0L0GICA SINICA June2005 CMV甜瓜分离物外壳蛋 白基因的克隆及植物表达载体的构建* 马新艳 ，古勤生 ，刘丽锋 ，李 宁 ，杨 民和。，彭 斌 ，李 莉 (1．中国农业科学院郑州果树研究所生物技术 中心 ，河南郑州 450009；2．江西农业大学农学院，江西南 昌330045；3．福建师范大 学生物工程学 院，福建福州 350007) CloningandConstruction ofPlantExpressionoftheCoatProteinGeneof aM elon IsolateofCucumberM osaicVirus MA Xin—yan～，GU Qin—sheng 一 ，IIU Li—feng ，IINing ，YANG M in—he。，PENG Bin ，LIIi (1．ZfiengzhOblInstitute0，Pomology，CAAS．Zhengzhou450009．China；2．CollegeofAgriculture．JiangxiAgriculturalUni versity，Namhang330045，China；3．CollegeofBiologicalEngineering，FujianNormalUniversity，Fuzhou350007，China) Abstract：ThecoatproteingeneofCucumbermosaicvirus(CMV)from melonisolate(CH99／90) wasamplifiedbyRT——PCR from thetotalRNA ofinfectedzucchinileavesandclonedintopUCm—— T vector．Thegeneconsistedof657nucleotidesencoding 218putativeaminoacids．Nucleotide sequencealignmentsshowed thattheCP gene shared 92．2 ～ 93．9 homologywith thatof CMV subgroupIstrains，whereasonly76．8 ～ 77．8 homologywiththatofCM V subgroupII strains．Thenucleotidesequenceshared91．8 ～ 93。4 homologywith CM V isolatepreviously reportedfrom ChinaexceptforXBisolate．ThismelonisolatewasclassifiedintosubgroupIbased on thesedata．Thegenewasconstructedintoplantexpressionvectorbyusingintermediatevector pJIT163(recombinantplasmiddesignatedaspBCP)．Therecombinantplasmidwastransferred intocompetentcellsofAgrobacterium tumefaciensLBA4404．Transformationofthegeneinto watermelonisundertaking． Keywords：CMV ；Chineseisolate；Coatproteingene；Sequenceanalysis；Plantexpressionvector 摘要：从河南省临颖县采集的病毒感染的甜瓜样本经 E1ISA检测和接种分离获得黄瓜花叶病毒 (Cucunbermosaic virus，CMV)分离物。把该分离物接种西葫芦，从发病 的叶片中提取总 RNA，并 以此为模板经 RT-PCR扩增获得 CMV 的外壳蛋 白(cp)基 因，将其克隆到 pUCm-T质粒上 。经序列测定和分析，结果表 明该 fp基