EBV_LMP1cDNA克隆与真核表达载体的构建及体外表达.pdfVIP

426 WEST CHINA MEDICAL JOURNAL 2005 , Vo120 , No3 　CN 51 - 1356/ R [文章编号] 1002 - 0179 (2005) 03 - 0426 - 04 EBV - LMP1 cDNA 克隆与真核表达载体的 Cloning EBV - LMP1 cDNA and Constructing Eukaryon Vector 构建及体外表达 pIRES - LMP1 and Its Expression in Vitro 1 ,3 2 1 2 赵菊梅 , 刘涛 , 田聆 , 梁传余 ZHAO J ü- mei1 ,3 , LIU Tao2 , TIAN Ling1 , et al. ( 1 四川大学华西医院肿瘤生物治疗研究中心·人类疾病生物治疗教育部重点实验室, 四川成都　610041 ; 2 四川大学华西医院耳鼻喉科, 四川成都　610041 ; 3 延安大学医学院药理教研室 , 陕西延安　716000) ( 1 Centerfor Biotherapy of Tumor , West China Hospital , Sichuan University. Key Laboratory of Biotherapy of Human Diseases , Ministry of Education , P. R . China. Chengdu 610041 , China ; 2Department of Otorhinolargngology , West China Hospital , Sichuan University , Chengdu 610041 , China ; ) 3Department of Pharmacology , Medical College of Yanan University , Yanan 716000 　　摘要 : 目的: 从鼻咽癌组织中克隆 EB 病毒潜伏膜蛋白 1 (LMP1) cDNA , 构建真核表达质粒 pIRES - LMP1 , 并检测其在体外的表达。方法 : 利用分子生物学技术 , 提取鼻咽癌总 RNA , 逆转录 PCR 获得LMP1cDNA , 克隆入 pDrive Cloning Vector 并测序 , 利用引物上设计的酶切位点NheI 和 EcoRI 将LMP1 插入真核表达质粒pIRES 中 , 测定 序列后 , 用脂质体包裹转染 COS 细胞 , 采用 RT - PCR 和 Western blot 检测LMP1 的表达。结果: 扩增的 LMP1cDNA 为 1301bp , 核酸序列测定证实本实验所构建的质粒正确 , 该表达质粒在体外转染 COS 细胞后可表达 LMP1 分子。 结论 : 实验所构建的pIRES - LMP1 表达质粒能在体外表达LMP1 分子。 　基金项目 : 国家自