八肋游仆虫中心蛋白性质和功能的研究.docVIP

八肋游仆虫中心蛋白性质和功能的研究 【摘要】：中心蛋白是EF-hand钙结合蛋白，是钙调蛋白超家族中的一员。它含有4个EF-hand结构基元，每个结构基元能结合一个钙离子，是很多生物体(如藻类、酵母、原生动物、高等植物、哺乳动物等)的中心体(基体或纺锤极体)的重要组成部分。中心蛋白在细胞的正常分裂以及包含中心蛋白的纤维系统收缩中起重要作用。八肋游仆虫是一种进化上处于特殊地位的单细胞真核生物，存在于八肋游仆虫的中心蛋白是由168个氨基酸残基组成的单肽链酸性蛋白质，分子量约为20KD，不含半胱氨酸和色氨酸。对该中心蛋白的研究，不仅有助于阐明低等真核生物的细胞分裂、细胞运动等重要生命活动过程的本质，而且将其用作稀土离子进入生物体细胞内的主要靶蛋白的模型，对深入研究稀土生物学效应的化学基础具有重要意义。首先利用PCR技术，在野生型八肋游仆虫中心蛋白的基础上得到4个定点突变体(G115W、D37K、D73K、D146K)和2个截短中心蛋白分子(P23、P123)的基因片段，序列测定表明构建的基因片段和预期的设计相吻合。采用基因重组技术，将这些不同的目的基因片段分别与表达载体pGEX-6p-1连接，转入大肠杆菌BL21菌株，分别获得重组菌，经IPTG诱导实现可溶性融合蛋白表达。经GST亲和层析和HitrapQ离子交换层析两步纯化，获得了115色氨酸、37、73、146位赖氨酸突变蛋白，以及包含