红壤样品S1、S2微生物总RNA.的提取方法及比较.docVIP

红壤样品S1、S2微生物总RNA.的提取方法及比较 目的及原理：RNA分子的分离提取是分子生物学研究中的基本内容，是进行基因表达分析的基础。从生物体中提取高质童的RNA是进行基因克隆和基因表达分析的基础。从土壤微生物中提取纯度高和完整性好的RNA是研究微生物表达组学的重要前提。RT-PCR、cDNA合成、Northern印迹杂交、cDNA文库构建等分子生物学研究均需要有高质量的RNA。环境微生物总RNA的提取由于环境样品中RNA酶含量丰富，RNA易被降解，给提取分离带来了许多困难。本实验通过对4种方法提取的水稻土微生物RNA产量和质量进行了比较，筛选适合于典型水稻土的RNA提取方法。 实验方案： 方法1用液氮研磨法提取的RNA提取量最高，但需要纯化后才能满足RT-PCR等后续分子生物学要求；方法2用玻璃珠破碎法提取的RNA提取量稍低，但RNA纯度较高，可以直接用于RT-PCR等后续实验；方法3用试剂盒提取的RNA纯度高，但提取量最低，成本高，且对土壤样品有选择性；方法4未能提出供试土壤的微生物RNA.。 具体过程： 总RNA的提取： 1.1方法1液氮研磨法参考Hurt等方法，并作适当修改.具体步骤如下：①称取2 g干土和2g烘干的无菌沙(粒径约0.25 mm)放于预冷研钵中.②倒入液氮，研磨约5 min，研磨过程中不断添加液氮，防止其完全挥发.③将研磨样品放入50 mL离心管中，加