第三章 高效液相色谱法 A.ppt

（二）紫外检测器 原理：基于被分析组分对特定波长紫外光或可见光的选择性吸收 定量基础：比耳定律， 比耳定律 光能量∶ I0 = 入射光强度 I = 透过光强度 光通量(透过率%)∶ T= I/I0 吸光度∶ A = -log(T)= log(I0/I) 吸光度 ∶ A = abc 流动池示意图 定波长检测器 紫外检测器种类 可变波长检测器 二极管阵列检测器DAD 第一种类型：固定波长紫外检测器 光源 低压汞灯，发出90%的254nm波长的光 锌灯，发出214nm波长的光 镉灯则为229nm和326nm 特点： ? 结构紧凑、造价低、操作维修方便、灵敏度高，适于梯度洗脱 ? 只能对具特征波长有吸收的物质进行检测 第二种类型：可变波长紫外检测器 氘灯 190～600 nm 新发展 ﹠可以 高灵敏度4 波长同时检测 ﹠根据4波长测定得到的吸收值之比判断峰的纯度 ﹠具有DAD检测器的相似功能 第三种类型：光电二极管阵列检测器（DAD） 光电二极管阵列检测器 DAD检测器的主要特点： ①可以同时得到多个波长的色谱图，可以计算不同波长处的相对吸收比 ②可以在色谱分离同时，对色谱峰的指定位置实时记录吸收光谱图，并得到最大吸收波长 ③在色谱运行期间，可以逐点进行光谱扫描，得到时间—波长—吸收值为坐标的三维图形  DAD检测器的主要特点（续 ） ④可以选择宽波带进行检测，一次就能把所有组分检测出来 DAD检测器的一些特殊功能： ⅰ.色谱峰的准确定性 ⅱ.进行峰纯度的检验 ⅲ.选择最佳波长 ⅳ.建立光谱库，检索被测样品的光谱 例：山梨酸和苯甲酸部分 分离的色谱峰 a.山梨酸 b.苯甲酸 c.混合物 紫外普通检测器和光电二极管阵列检测器的比较 普通检测器 光电二极管阵列检测器 （三）荧光检测器（FLD） 荧光检测器是利用测量化合物荧光强度，对化合物进行检测的检测器。 在实验条件固定，样品浓度较低时，荧光强度与样品浓度呈线性关系，因此荧光检测器是浓度敏感性检测器，可直接用于定量分析  主要特点： ①灵敏度高（高于紫外吸收检测器两个数量级 ） ②选择性好 产生荧光的必要条件： 第一：物质分子中具有能吸收激发光能量的吸收带，即物质分子必须具有一定的吸收结构 第二：物质分子吸收了激发光能量之后具有高的荧光效率 ③定量分析时线性范围较窄 ④受外界条件的影响小 ⑤当所选用的流动相溶剂不发射荧光，FLD就能适用于梯度洗脱 ⑥最小检测浓度可达0.1ng／ml，适用于痕量分析 ⑦氨基酸、胺类、维生素、甾族化合物及某些代谢药物都可以用荧光法检测 原理：化合物受到紫外光的照射后，吸收辐射能，发出比吸收波长长的特征辐射，这种特征辐射光线就是荧光,测定发出的荧光能量即可定量 主要包括：激发光源、选择激发波长用的单色器、流通池、选择发射波长用的单色器、用于检测发光强度的光电检测器 目前使用比较多的是激光诱导荧光检测器。组成与普通的荧光检测器一样。 两者的主要区别为光源，前者光氙弧灯（连续式、脉冲式），后者的光源是激光器，使用较多的是小功率的Ar离子激光器 （四）示差折光检测器（DRD） 原理：示差折光检测器是通过连续监测参比池和测量池中溶液的折光指数之差来测定样品浓度 是通用型检测器,如果选择合适的溶剂，几乎所有的物质都可以检测 特别适用于检测没有紫外吸收的化合物,例如糖类,醇类,酯类以及脂肪酸等 高分子化合物GPC,GFC分析以及复杂样品纯化 对温度变化敏感 不能用于梯度洗脱 不宜用于痕量分析 标准糖类混合物(单糖和糖醇) 样品：1. 麦芽三糖 2. 蔗糖 3. 葡萄糖 4. 半乳糖 5. 果糖 6. 甘露醇 7. 阿拉伯醇 8. 山梨醇 分析条件： 柱：CHO－620(Ca 2＋)聚合物柱 洗脱液：蒸馏水 流速 ；0.5ml/min 温度 ：90 dig.C. 检测器：RI 进样量：20微升 （五）电化学检测器（ECD） 电导检测器是一种选择性检测器，用于检测阳离子和阴离子，在离子色谱中应用广泛 特点： ①灵敏度高，最小检测量一般为ng级，有的可达pg级 ②选择性好，可测定具有电解活性物质（亦可测定大量非电活性物质中极痕量的电活性物质） ③线性范围宽，一般为4～5个数量级 ④测量时要恒温，不宜用于梯