- 1、本文档共2页,可阅读全部内容。
- 2、原创力文档(book118)网站文档一经付费(服务费),不意味着购买了该文档的版权,仅供个人/单位学习、研究之用,不得用于商业用途,未经授权,严禁复制、发行、汇编、翻译或者网络传播等,侵权必究。
- 3、本站所有内容均由合作方或网友上传,本站不对文档的完整性、权威性及其观点立场正确性做任何保证或承诺!文档内容仅供研究参考,付费前请自行鉴别。如您付费,意味着您自己接受本站规则且自行承担风险,本站不退款、不进行额外附加服务;查看《如何避免下载的几个坑》。如果您已付费下载过本站文档,您可以点击 这里二次下载。
- 4、如文档侵犯商业秘密、侵犯著作权、侵犯人身权等,请点击“版权申诉”(推荐),也可以打举报电话:400-050-0827(电话支持时间:9:00-18:30)。
- 5、该文档为VIP文档,如果想要下载,成为VIP会员后,下载免费。
- 6、成为VIP后,下载本文档将扣除1次下载权益。下载后,不支持退款、换文档。如有疑问请联系我们。
- 7、成为VIP后,您将拥有八大权益,权益包括:VIP文档下载权益、阅读免打扰、文档格式转换、高级专利检索、专属身份标志、高级客服、多端互通、版权登记。
- 8、VIP文档为合作方或网友上传,每下载1次, 网站将根据用户上传文档的质量评分、类型等,对文档贡献者给予高额补贴、流量扶持。如果你也想贡献VIP文档。上传文档
查看更多
SOD活性测定(连苯三酚自氧化法).doc
SOD(超氧化物歧化酶)活性测定
连苯三酚自氧化法
(邓碧玉,袁勤生,李文杰.改良的连苯三酚自氧化测定超氧化物歧化酶活性的方法[J].生物化学与生物物理进展.1991,18(2):163)
一、原理
超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)普遍存在动、植物的体内,是一种清除超氧阴离子自由基的酶,它催化下面的反应:
反应产物H2O2可由过氧化氢酶进一步分解或被过氧化物酶利用。
二、材料、仪器设备及试剂
(一)材料
植物器官(花瓣、叶片等)
(二)仪器设备
冰箱、低温高速离心机、微量加样器 (1mL、20μL、 100μL)、移液管、精密电子天平、UV-752型紫外分光光度计、试管、研钵、剪刀、镊子
(三)试剂
(1) A:Tris(三羟甲基氨基甲烷)0.2mol/L (121.14):取24.228g定溶至1000mL
(2) B:HCl (分析纯36-38%) 12当量:即12mol/L 取8.3mol/L定溶至1000mL
(3) 250mLA+200mLB定溶至1000ml PH=8.3
三、试验步骤
(一)酶液的制备
(1)称取植物材料0.2g,加50mmo·L-1的Tris-HCl缓冲液(pH=8.3)1mL(分三次加)
(2)2~4℃下研磨,12000r/m离心15min,制备粗酶液(每个样品设三个重复)
(3)在25℃保温20min的8mL50mmol/L(PH=8.3)Tris-Hcl缓冲液中加入25℃预热的10μL 50mmol/L的连苯三酚(对照管用10mmol/LHcl代替)先加酶液再加连苯三酚
(二)酶活力的测定
酶活性单位的定义:在1mL反应液中每分钟抑制连苯三酚自氧化速率达50﹪的酶量定义为一个活性单位。取两个石英比色杯(带盖),按下表加入反应物
试剂 对照管 样品管 Tris-Hcl缓冲(pH=8.3) 8mL 8mL 粗酶液 - 15μL 连苯三酚溶液 - 10μL HCl 10μL - 总量 8mL 8mL 从加入连苯三酚开始计时,迅速摇匀,使酶与底物充分反应,倒入比色杯,在752型分光光度计上每隔30s读取反应液的325nm处OD值,连续读6min。
四、利用下列公式计算酶活力
酶活力(u/mL)= {[(0.070-A325nm/min)/0.070]×100%}/50%×反应液总体积×(样液稀释倍数/样液体积)
={[(0.070-A325nm/min)/0.070]×100%}/50%×8mL×(8mL/15μL)
={[(0.070-A325nm/min)/0.070]×100%}/50%×284.4444
= [(0.070-A325nm/min)/0.070] ×568.8888
= (1- A325nm/min/0.070) ×568.8888
文档评论(0)