猕猴桃根抗肿瘤作用研究论文.pdfVIP

猕猴桃根抗肿瘤作用研究 楼丽君 吕定量 胡增仁 钟松阳 浙江省衢州市人民医院（324000） 猕猴桃根（民间又叫藤梨根），为猕猴桃科植物猕猴桃的根或根皮，具有清热解毒、活血消肿、 祛风利湿的作用。我国南方地区尤其在浙江衢州，金华，温州，杭州等地，民间广泛应用猕猴桃根 治疗胃癌，肺癌，鼻咽癌，肝癌，结肠癌等肿瘤。虽然猕猴桃根民间应用较多，但目前国内、外对 猕猴桃根开展系统的抗肿瘤作用研究较少，并且相当初浅。邹益友等人发现猕猴桃根乙酸乙酯提取 物对体外原代培养的白血病、结肠癌肿瘤细胞增殖有抑制作用；但他们没有进行进一步的体内抗肿 瘤实验。许继平等人发现含有猕猴桃根的中药复方昭黄散能够延长病人的疾病稳定期，延长生存期， 减轻化疗药物的毒副作用；但该实验所用昭黄散为一中药复方，除猕猴桃根外，该方内尚含壁虎， 太子参，三七，大黄等其他中药，因此，虽然昭黄散有抗肿瘤作用，但猕猴桃根本身的抗肿瘤作用 仍没有得到确定。本实验在以上研究的基础上，对猕猴桃根的抗肿瘤活性进行较系统的评价，希望 进一步了解猕猴桃根的抗肿瘤作用。 1 材料和方法 1.1 试剂及仪器 RPMI-1640 、DMEM 购自Gibico BRL 公司；胎牛血清购自Hyclone 公司；磺酰 罗丹明B （Sulforhodamine B,SRB ）购自Sigma。酶标仪：POLAR star 型号，德国BMG 公司产品。 1.2 细胞培养 淋巴瘤Ramos 细胞、非小细胞肺癌A549 细胞、乳腺癌MCF-7 细胞购自美国ATCC （American Type Culture Collection ）；肝癌Bel-7402 细胞购自中国科学院上海生物化学与细胞生物 学研究所细胞库。MCF-7 细胞用DMEM 培养，其他细胞用RPMI-1640 培养；培养基均添加体积分 5 -1 -1 数10％胎牛血清，1×10 U.L 青霉素，100mg.L 链霉素；培养条件：5 ％CO ，37°C ，饱和湿度。 2 4 1.3 体外抗肿瘤活性 肿瘤细胞0.4-1.0 ×10 /孔接种于96-孔板，24 小时后，加入猕猴桃根提取物， 使培养基中提取物的终浓度为0.001-100 µg.ml-1 。处理72 小时后，弃去培养液，用10%冷三氯醋酸 固定细胞。然后用SRB 溶液染色。洗去未结合SRB 后，用Tris 溶解与蛋白结合的SRB，用酶标仪 在520nm 波长下测定OD 值，以下列公式计算细胞生长抑制率： 抑制率= （OD 值 －OD 值 ）/OD 值 ×100%。 对照孔 给药孔 对照孔 根据各浓度抑制率，采用Logit 法计算半数抑制浓度IC50 。 1.4 猕猴桃根的提取和分离 猕猴桃根采自浙江省衢州市。500g 干燥猕猴桃根粉碎后，用甲醇回流 3 次，每次2L 甲醇；过滤后，真空干燥，溶解在蒸馏水中。水相提取物（W ）再分别用乙酸乙酯、 氯仿、正丁醇提取3 次，分别得到乙酸乙酯（E ）组分4.2g,氯仿组分（C0 ）3.3g, 和正丁醇组分（B ） 6.1g 。氯仿组分进行H60 硅胶柱层析（5cm 内直径，25cm 长），应用氯仿：甲醇梯度50:1, 20:1,10:1, - 181 - 5:1, 2:1, 1:1 每次200 mL ）洗脱，得到5 个组分，分别命名为C1（156.6mg）, C2（600mg ），C3（300.5mg ）， 4 （823.2mg ）,C5 （657.4mg ）。 1.5 体内抗肿瘤作用研究 1.5.1 小鼠肿瘤模型实验 昆明种小鼠，♀，5-6 周龄，购自上海斯莱克实验动物有限责任公司；合 格证