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PCR预混合物 常见问题解答 　 1. 请问如何定制Bioneer公司的PreMix? 2. 百奥尼公司的PCR PreMix与其它公司同类产品相比有何不同之处？ 3. 使用Bioneer公司的PCR PreMix扩增后可以直接进行琼脂糖凝胶电泳吗？ 4. 如果PCR总是出现非特异性扩增带，可能是什么原因？ 5. PCR扩增时阳性对照有条带，而样品则无，原因是什么？6. PCR产物在凝胶上呈Smear状态，原因是什么？　 　 Q1. 请问如何定制Bioneer公司的PreMix?????????????????????????????????????????????????????????????????????? ↑TOP A1. 我们可以根据您的需求提供PCR，RT及RT-PCR PreMix定制服务。根据您的实验条件可以定制加入不同酶的预混合物。定制成分和参数信息如下： 引物（可选）：如果您需要在预混合物中加入引物，我们会根据您提供的序列信息合成引物并添加到 PCR预混合物中。如果您不需要引物，我们也可以提供不含引物的PCR预混合物。 反应体积：您可以选择10ul,20ul或50ul的反应体积。 包装类型：0.2ml 8联管,96孔PCR板等。 定制数量： 因为生产成本的原因，您每次至少需要定制3000管最小体积的预混合物。 缓冲液：我们将根据您的需要配制最适合的缓冲液体系。 示踪染料：您可以选择在试剂盒中加入或是不加入示踪染料。 ? Q2. Bioneer公司的PCR PreMix与其它公司同类产品相比,有何不同之处????????????????????????????? ↑TOP A2. 我们的PCR PreMix系列每款产品都是包含有dNTPs，示踪染料，反应缓冲液及DNA聚合酶的冻干混合物，专利的化学稳定剂可以使混合物在室温保存一个月或冻存两年而不失去活性。单管包装，使用时易于重悬，只需简单添加DNA模板和引物即可，就是这么简单！其他公司的同类产品多为液体形式，而且不是独立单管包装，需要另外购买耗材，试剂可以稳定保存的时间也相对较短。 ? Q3. 使用Bioneer公司的PCR PreMix扩增后可以直接进行琼脂糖凝胶电泳吗???????????????????????????????? ↑TOP A3. 可以，我们的PCR预混合物中包含电泳所需的示踪染料和沉淀剂，反应产物无需添加任何额外的上样缓冲液就可直接进行琼脂糖凝胶电泳。 　 Q4. PCR总是出现非特异性扩增带的原因是什么?????????????????????????????????????????? ?????? ????????? ↑TOPA4. PCR扩增后出现的条带与预计的大小不一致，或者同时出现特异性扩增带与非特异性扩增带。非特异性条带的出现，其原因有可能是：（1）引物与靶序列不完全互补、 或引物聚合形成二聚体。（2）Mg2+离子浓度过高、退火温度过低，或者PCR循环次数过多。其对策有：必要时重新设计引物。降低引物量，适当增加模板量，减少循环次数。适当提高退火温度或采用二温度点法(94变性，65左右退火与延伸)。 ? Q5. PCR扩增时阳性对照有条带,而样品则无,原因是什么????????????????????????????????????????????????????????????????? ↑TOPA5. 模板中含有抑制物或者模板量太少；引物设计不当或者发生降解；退火温度太高，延伸时间太短。解决办法： 纯化模板或者使用试剂盒提取模板DNA或加大模板的用量。重新设计引物（避免链间二聚体和链内二级结构）或者换一管新引物。降低退火温度、延长延伸时间。? ? Q6. PCR产物在凝胶上呈Smear状态,原因是什么?????????????????????????????????????????????????????????????????????????????? ↑TOPA6. 可能是模板不纯，应该对模板进一步纯化。 ?????? 退火温度偏低，可以适当提高退火温度。 ?????? 循环次数过多，应适当减少循环次数 。