NGF+VEGF+Bcl-2及Bax在db%2fdb自发性糖尿病小鼠颌下腺表达.pdf

中文摘要 NGF、VEGF、Bc卜2及Bax 在db／db自发性糖尿病小鼠颌下腺的表达 摘 要 目的；应用光镜及免疫细胞化学技术观察转基因糖尿病小 鼠颌下腺的病理形态学改变以及神经生长因子(nerve growth cell endothelial factor,NGF)血管内皮细胞生长因子(Vascular growth 达的变化，旨在说明糖尿病时颌下腺功能损害与上述因子间的 关系，为糖尿病临床及基础研究提供实验依据。 f背景：众所周知，糖尿病典型临床症状之一是口渴多饮。 动物实验发现，该症状可能与糖尿病时颌下腺病理改变及功能 降低有关。目前认为细胞凋亡不仅包括正常情况下的细胞死 亡，也涉及异常隋况下细胞程序|生死亡，推测糖尿病颌下腺病 理性萎缩可能属于后者。Bcl—之和Bax是作用相佐的凋亡相 关基因，其在糖尿病颌下腺表达变化的研究，国内外未9i!报道。 此外，糖尿病瞄申经病变及糖尿病性微血管病变是糖尿病两大 并发症，其发生机制尚未确定。即往研究多局限于代游障碍方 面而对于维持神经系统功能特别是交感神经系统功能的神经 生长因子(8 0％由颌下腺产生)这一重要生物活懒的研 EG 究贝0很少报道。至于V F与糖尿病时微血管改变的关系研 究更少。 方法：引进日本C57BM(s卜1db／+m表型正常隐眭基因小 鼠，饲养于无菌包中，自由摄水，饮食，近亲(兄妹)交配， 其纯合子后代，即为dNdb(单基因遗传自然发病型)糖尿病 中文摘要 小鼠。该鼠将肥胖基因和单—劣陆瞎尿病基因连锁在一起，故 表型肥胖的小鼠理论上伴发糖尿病，相当于人类II型糖尿病， 是研究非胰岛素依赖型糖尿病(NIDDM)的良好动物模型。 生后4周起，自尾静脉取血监测血糖，平均血糖值升高达 10mmol／L以一咀同时伴发肥胖者确定为糖尿病鼠，选取3、4、 6、8、lO月龄db／db糖尿病小鼠及相应年龄段的db／+m正常小 鼠(正常鼠)。40／0多聚甲醛灌流固定，取颌下腺，40／0多聚甲醛 后固定，常规石蜡包埋，连续切片，HE染色。应用SP免疫组 织化学方法对NGF、VEGF、Bcl-2及Bax4种抗原进行标记， 计算机系统进行图象分析，统计NGF、v】巳GF、Bcl-2及Bax 在腺组织内免疫阳性表达的细胞数。同时，光镜下观察4种抗 原在颌下腺各部位的表达情况。数据的统计学处理采用析因实 验设计方差分析。当因素间有交互作用时，采用Duncan多组 极差检验做均数间的两两比较，因素间无交互作用时，采用q 检验做均数间的两两比较。 结果：随着糖尿病发展，颌下腺组织萎缩，细胞缩小，形 态不规则，排列不整齐。颌下腺间质增生，可见血管增多。免 疫组织化学显示，VEGF、tBax、NGF、Bcl-2在正常及糖尿病 组颌下腺中均有表达。在db／db糖尿病小鼠VEGF、Bax阳性 细胞数随着糖尿病进展有一明显增多趋势，且与各同龄正常鼠 相比明显增强。NGF、Bcl．2／贝4逐渐减允呈下降趋势，二者均 明显低于相应正常鼠。／叫 结论：db／db糖尿病可导致颁下腺组织萎缩及实质细胞形 态学改变。随着病程延长，NGF、Bcl02表达呈下降趋势，而 VEGF、Bax则逐渐增力11。NGF阳性细胞数的减少说明颌下腺 颗粒曲管细胞合成和分泌NGF功能刚氐，而NGF缺乏与糖尿 中文摘要 病幽申经病变密切相关。VEGF在糖尿病颌下腺表达增强，可 能与缺氧有关，进而导致间质血管增生，新血管形成，这也是 糖尿病性微血管病变的相关因素之一。此外，本实验db／db糖 尿病小鼠颌下腺中抑制细胞凋亡的Bcl-2表达的降低及促进细 胞凋亡的Bax的增加提示随着糖尿病发展，颌下腺实质细胞有 凋亡增加的趋势，而这种细胞凋亡可能是组织萎缩和功能受损 的重要