FRIL 蛋白体外维持脐血造血干祖细胞作用及细胞周期调控基因表达.pdfVIP

306 生理学报Acta Physiologica Sinica, June 25, 2004, 56(3): 306-312 研究论文 FRIL 蛋白体外维持脐血造血干 / 祖细胞的作用及细胞周期 调控基因的表达 * 谢小燕, 谢超, 师伟, 李锦, 李艳华, 王冬梅, 白慈贤, 陈琳, 裴雪涛 军事医学科学院输血研究所, 北京 100850 摘 要: 为探讨新的豆类凝集素(Flt3 receptor-interacting lectin, FRIL)体外维持脐血 CD34+ 细胞的作用以及维持过程中细胞周期调 控基因 HTm4 及 HTm4S mRNA 的表达及意义, 我们利用FRIL 维持培养脐血 CD34+ 细胞, 对其增殖曲线、细胞周期及集落形 成能力进行常规分析, 并用半定量RT-PCR 法分别测定FRIL 体外维持不同时间后脐血 CD34+ 细胞中周期调控基因HTm4 及 HTm4S mRNA 的表达变化。结果显示, FRIL 培养的 CD34+ 造血干/ 祖细胞的增殖趋势平缓, 整个培养期间细胞增殖倍数不超 过起始的 3 倍; 14 d 之前, FRIL 培养细胞的高增殖潜能集落形成细胞(HPP-CFC)形成集落数与FL 组无差别, 其后则维持高于 FL 的情况。细胞周期分析则显示, 在 28 d 的培养过程内, 利用FRIL 培养的细胞始终有 80% 以上维持在G0 期; 而周期调控基因 HTm4 及 HTm4S 在刚分离的脐血 CD34+ 细胞中的表达水平较高; 但培养 1 d 后, 几乎检测不到HTm4 基因的表达; 培养 3~14 d, 该基因的表达回升并持续维持在高水平。而HTm4S 基因的表达在第 7 d 达最高水平, 其余时间基本呈稳定表达。转染 HTm4 和 HTm4S, 亚细胞定位结果显示HTm4 主要定位于核周围, 而HTm4S 则定位于整个胞浆, 由此可能导致它们功能的区别。以 上结果提示, 长期培养体现出FRIL 在维持造血干/ 祖细胞多能性上的优势; 细胞周期调控基因HTm4 及其新剪接子参与了 FRIL 体外长期维持脐血造血干/ 祖细胞处于静息状态的过程。 关键词: 细胞生物学; 造血干/ 祖细胞; FRIL 蛋白; 细胞周期调控; 半定量RT-PCR; HTm4 基因; HTm4S 基因 中图分类号: R331.2 + The maintenance of cord blood CD34 progenitor cells with plant lectin FRIL in vitro and the expression of related cell cycle modulator HTm4 and HTm4S XIE Xiao-Yan, XIE Chao, SHI Wei, LI Jin, LI Yan-Hua, WANG Dong-Mei, BAI Ci-Xian, CHEN Lin, PEI Xue-Tao* Department of Stem Cell Biology, Beijing Institute of Transfusion Medicine, Beijing 100850, China Abstract: Ex vivo maintainance of human stem cells is crucial for many clinical applications. Current culture conditions provide some level support but cytokines induce most quiescent stem cells to proliferate and differentiate. Better control of primitive cells is needed to extend the time and r