β-catenin与大鼠慢性心肌缺血所致心肌重构关系研究.pdfVIP

β-catenin 与大鼠慢性心肌缺血所致心肌重构 关系的研究1 1 2 1 1 1 1 1 1，3 王玉平 ，张勇 ，杭鹏洲 ，赵金龙 ，纪红蕊 ，王莉安 ，毕辉 ，杜智敏 1 哈尔滨医科大学临床药理教研室，哈尔滨（150081 ） 2 哈尔滨医科大学药理教研室，哈尔滨（150081 ） 3 黑龙江省生物医药重点实验室-省部共建国家重点实验室培育基地，哈尔滨（150081 ） E-mail:dzm1956@126.com 摘 要：目的研究β-catenin 在大鼠心肌缺血所致心律失常时的变化，探讨其与心机重构的 关系及机制。方法 结扎大鼠左旋冠状动脉前降支建立心肌缺血模型，取心脏组织，并分别 用Western blot 和免疫荧光法观察β-catenin 随着缺血时间的延长蛋白表达的变化。同时建立 胆碱干预的急性心肌缺血模型，在缺血前 15min iv 胆碱 10mg/kg,用Western blot 检测胆碱对 β-catenin 表达的影响。结果 随着缺血时间的延长，β-catenin 表达增加，且在急性心肌缺血 模型中的胆碱组β-catenin 的表达高于缺血组。结论 β-catenin 参与了慢性心肌缺血所致的心 肌重构，其作用可能是由于缺血本身激活了对胆碱敏感的受体，该受体直接或间接激活了 β-catenin。 关键词：β-catenin；心肌缺血；胆碱；心肌重构 中图分类号：R96 1. 引言 近来研究表明，β连环素（β-catenin ）除了参与细胞间黏附外，作为 Wnt 信号通路的关 键因子，在心脏的早期胚胎形成及发展过程中起重要作用[1,2] 。有研究报道，β-catenin 的稳 定表达能减少由于血管紧张素 II 长期作用所致的心肌肥厚[3] 。目前关于 β-catenin 在心脏上 作用的研究国内报道较少，β-catenin 与心肌缺血所致心肌重构及作用机制的研究还未有报 道。本文通过建立心肌缺血的动物模型，用免疫印迹和免疫组化的方法阐明了 β-catenin 在 心肌缺血中的变化及作用机制，为心脏疾病的防治提供新的药物作用靶点及临床用药依据。 2. 材料和方法 2.1 材料 2.1.1 实验动物 Wistar 大鼠（雄性，250±20g ），25 只，由哈尔滨医科大学附属第二医院实验动物中心 提供。 2.1.2 主要试剂 抗 β-catenin 单克隆抗体 Santa Cruz 生物技术公司；红外荧光标记的二抗AlexaFluor 594 购自 Molecular Probes 公司； BCA 蛋白定量试剂盒购自 Pierce 公司；Western blotting 封闭 蛋白干粉为博士德生物工程有限公司产品；PVDF 膜为 Bio-RAD 公司产品；蛋白酶抑制剂、 蛋白电泳液、转膜液和考马斯亮蓝染液均为华特生生物技术公司产品；胆碱由药理教研室惠 赠；BSA 为 Amresco 公司产品；多聚甲醛（分析纯，天津市科密欧化学试剂开发中心产品）； 蔗糖（分析纯，天津市丽区天大化学试剂）。 1本课题得到高等学校博士学科点专项科研基金（No.20050226010 ）资助。 - 1 - 2.1.3 仪器 差速离心机为日本 Hitachi 公司产品；蛋白电泳仪为 Bio-RAD 公司产品；CM-1850 冰冻 切片机为 Leica 公司产品；免疫荧光显微镜为 Nikon 公司产品；Odyssey 红外扫描成像系统 为美国 LI-COR 公司产品。 2.2 方法 2.2.1 制备大鼠心肌缺血模型 慢性心肌缺血模型[4] ：大鼠用 10%水合氯醛（30mg/kg,ip ）麻醉，仰卧位固定，四肢连 接心电图机，记录标准 II 导联心电图，接呼吸机。沿胸骨左缘 3～4 肋间开胸，