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环境因素对微生物的影响和紫外诱变效应 姓名：王韬 班级：生76 组号：7-2组 同组人：袁堂谧 实验日期：2009-11-26 实验目的： 了解物理因素、化学因素及生物因素抑制或杀死微生物的作用及其试验方法。 了解紫外诱变的原理和紫外诱变在育种方面的应用。 练习单菌落划线分离微生物。 实验原理： 微生物对微生物的影响：温度通过影响酶活力、蛋白质和核酸的活性来影响细胞新陈代谢。微生物群体生长、繁殖最快的温度是微生物生存的最适温度。但不一定是积累某一代谢产物的最适温度。黏质赛氏杆菌能产生红色或紫红色色素，菌落表面颜色随着色素量的增加呈现出由橙黄到深红色逐渐加深的变化趋势。 化学因素对微生物的影响：多种化学物质通过不同原理影响微生物的生长。例如重金属离子可以与菌体蛋白质结合而使之变形。有机溶剂可以使蛋白质和核酸变性或溶解细胞膜。 生物因素对微生物的影响：许多细菌在生命过程中产生某些特殊的代谢产物如抗生素。这些物质可以影响其它微生物的生长。青霉素对革兰氏阳性菌的作用强于阴性菌。链霉素作用于原核生物。 紫外线对微生物的影响： 紫外线具有杀菌作用，主要因为它诱导形成胸腺嘧啶二聚体来破坏DNA的结构，使其不能行使正常功能。另外，空气在紫外线照射下产生臭氧，也有一定杀菌作用。紫外线杀菌最强的波长是226-256nm。可见光能激活生物体中的光复活酶，使形成的二聚体拆开复原，部分或全部消除紫外线的作用，所以杀菌或诱变后的微生物应避光。 紫外线对细菌生长的作用。我们可以利用个体经紫外线照射后的遗传特性会发生改变这种特性来进行灭菌或菌种选育工作。紫外线诱变最有效的波长仅仅是253-265nm，一般紫外线杀菌灯所发出的紫外线波长大约有80%为254nm。 实验材料： 菌源：金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、枯草杆菌菌液（18h）、粘质赛氏杆菌平板1个 培养基：淀粉培养基平板 实验试剂： 0.%碘液，1%甲醛，1%过氧化氢， 75%乙醇，95%乙醇， 1%稀释的84消毒液 实验仪器： 25 ℃ 、30 ℃ 、37 ℃培养箱等，紫外照射箱 划线接种，要保证能得到单一菌落。 25℃，第二个在30℃进行培养，第三个在37℃进行培养。24h后取出，观察不同温度下培养粘质赛氏杆菌生长状况和产生色素情况。 化学因素对微生物生长的影响 用无菌吸头吸取100μL培养18h的金黄色葡萄球菌菌液于肉汤蛋白胨培养基上，用无菌涂布棒涂布均匀。 将上述培养皿用记号笔分成六等份，每一等份内标明一种药物名称。 用无菌镊子将小滤纸片分别浸入各种药剂中，然后对号放入培养皿的小区内。注意不要造成药品交叉污染。 置37℃温室培养24h后，观察。比较抑菌圈大小。 生物因素对微生物生长的影响 用肉汤蛋白胨培养基制成平板，在平板一侧，用接种环取产黄青霉的孢子，在平板上划一直线接种，置于28℃培养48～72h。（已提前准备好） 待形成菌苔后，从距产黄青霉的菌苔边缘5mm处用接种环并分别垂直向外划直线接种已培养18小时的大肠杆菌、枯草杆菌和金黄色葡萄球菌。在37℃培养24h，观察结果。注意取菌不要太多。 用同样的方法做灰色链霉菌的抗菌谱试验。 紫外线杀菌效果的观察 用无菌吸头吸取100μL培养18h的金黄色葡萄球菌液于肉汤蛋白胨培养基平板上，以无菌涂棒涂布均匀； 用三张心形、圆环形和蘑菇形的纸条遮住部分平板培养基，打开皿盖，置紫外灯下照射3min后取出纸，盖上皿盖。 在黑暗中用双层报纸包裹，倒置于37℃培养24h后观察结果。 紫外线对微生物的诱变效应 取摇瓶培养至对数生长期的菌液0.1ml加入0.9ml生理盐水中，进行10倍稀释，依次做10-1～10-8稀释。 涂布：取各100μl菌液涂平板，每个稀释度涂平板2只。 紫外线（30W,30cm)处理： 10-6照射15s ,10-5照射20s， 10-4照射30s ,10-3照射40s、 10-2照射50s ,10-1照射60s。以10-7和10-8平板作对照。处理后的培养皿在黑暗中（或红灯下）用双层报纸纸包好，倒置37℃培养，24h后观察并记录结果。 实验结果： 温度对黏质赛氏杆菌菌落色素形成的影响，见下图及表格： 图1. 25℃下黏质赛氏杆菌的生长情况。 图2. 30℃下黏质赛氏杆菌的生长情况。 图3. 37℃下黏质赛氏杆菌的生长情况。 表1. 温度对黏质赛氏杆菌的影响 培养温度 实验现象 现象解释 37℃ 乳白色菌落 温度较高，导致蛋白质和核酸变性失活，代谢减弱 30℃ 橙红色（较深）菌落 温度适宜，代谢旺盛，从而积累色素 25℃ 橙红色（较浅）菌落 温度过低，使酶活力受到抑制，细胞代谢减弱 化学因素对微生物生长的影响，见下图： 图4. 化学因素对微生物生长影响的结果 各区所加试剂及抑菌圈结果如下表： 表2. 化学试剂对微生物生长影响结