新生鼠缺氧缺血后海马CA1区脑源性促红细胞生成素表达及意义.pdfVIP

新生鼠缺氧缺血后海马ＣＡ1 区脑源性促红细胞生成 素的表达及意义 1 1,* 2 1 卢俊杰 ，蒋犁 ，黄莉 ，张龙 1 东南大学临床医学院，江苏南京（210009 ） 2 东南大学附属中大医院儿科，江苏南京（210009 ） E-mail ：jianglinanjing@ 摘 要：目的 探讨新生鼠缺氧缺血后海马CA1 区脑源性促红细胞生成素(EPO)的表达变化, 推论脑缺氧缺血后内源性因素启动海马神经发生的机制。方法 选用144只7 日龄SD大鼠，随 机分为4组：正常对照组(C)、单纯缺血组(I)、单纯缺氧组(H)、缺氧缺血组(HI) ，每组又分为 1小时,6小时,16小时,1天,3天和7天共6个时间点。分别行HE染色和EPO免疫组织化学法观察。 结果 各组别EPO表达均有差异(F=387, p 0.0001) ，以缺氧缺血组最多; EPO表达有时间消长 规律，各时间点差异有统计学意义(F=53, p 0.001) ，脑缺氧缺血后16h,海马CA1 区脑源性EPO 表达达到较高水平,以后随时间延长逐渐下调。结论 脑源性EPO表达在新生脑缺氧缺血后增 加,受低氧影响最明显；EPO表达高峰在缺氧后早期，推测低氧、EPO早期高表达可能是参与 海马神经发生的内源性因素之一。 关键词：促红细胞生成素；神经发生；新生儿；缺氧缺血；海马 中图分类号：R722.12 文献标识码：A 促红细胞生成素(erythropoietin , EPO)是调节红细胞生成的糖蛋白,主要产生于胎儿的肝 脏和成人的肾脏, EPO和它的受体(erythropoietin receptor , EPO-R)主要存在于骨髓的造血干 细胞并刺激它向红细胞分化。但Knabe [1]发现，人类中枢神经系统的神经细胞、胶质细胞在 胚胎发育早期就有EPO及其受体表达。Shingo[2]研究显示，将EPO注入成体侧脑室，可导致 脑室下区神经干细胞的数量减少和迁往嗅球的新生细胞增加，及嗅球部新生中间神经元增 加，注入EPO抗体则有相反的结果。Danielyan[3]在大鼠脑的原代细胞培养中加入EPO可以减 轻低氧所致的神经元的丢失；进一步又证实，无论正常氧还是低氧环境，给予EPO干预，未 分化的神经元祖细胞（用nestin标记）增多。因此EPO 的促神经发生（neurogenesis ）作用越 来越受到重视。然而新生儿缺氧缺血性脑损伤（hypoxic-ischemic brain damage,HIBD ）后， 中枢神经系统脑源性EPO 的表达变化，国内尚未见报道。本文利用免疫组织化学SP ( Strept- avidin Peroxidase) 法检测了新生儿缺氧缺血性脑损伤后海马脑源性促红细胞生成素的表达 情况, 推论脑损伤后内源性因素启动海马神经发生的机制, 为探索新生儿HIBD治疗的新方 法提供了新的思路, 也为促红细胞生成素治疗HIBD提供实验依据。 1. 材料和方法 1.1 材料 模型制作和分组：出生7天的同窝Sprague-Dawley大鼠，雌雄不限，体重12-14g，由复旦 大学提供鼠种，东南大学医学院实验动物中心繁殖。按照Rice[4] 的方法, 144只7d龄SD大鼠， 分为正常对照组(C)、单纯缺血组(I)、单纯缺氧组(H)、缺氧缺血组(HI)，每组又分为6个时间 点(1 h ,6 h ,16 h , 1d，3d，7d) ,每个时间点正常对照组、单纯缺氧组各4只，两侧海马均观察； 单纯缺血组、缺氧缺血组各8只，观察手术侧海马。乙醚吸入麻醉后仰卧位固定。颈正中切 口，游离左侧颈总动脉，用4 - 0 号线结扎,缝合切口后放回原饲养环境中2 - 3 h，后置于2 000 mL密闭容器中，37℃恒温。以2L/ min 的速度输入8 % O2 、92 %N2混合气体持续2h ,取出后 置于原饲养环境中。单纯缺氧组、正常对照组时间点均与缺氧缺血组同步。