知芪益肾汤对实验性糖尿病大鼠肾功能的作用机制研究.pdfVIP

- 142 · 医药 2OlO年 2月第5卷第 6期 ChinaPracl~Ied． Feb2010．Vo1．5．No．6 知芪益 肾汤对实验性糖尿病大 鼠肾功能 的作用机 制研 究 丛艳 李金萱 【摘要】 目的 探讨知芪益肾汤对糖尿病肾病(DN)大鼠肾脏的保护作用及其发生机制。方法 腹腔注射链尿佐菌素 (STZ)建立糖尿病模型，检测血糖、UAER、Ccr，应用免疫组化法检测 CTGF及 TGF一 13的蛋 白表达。结果 知芪益肾汤组 UAER、Ccr显著低于糖尿病组 (P0．01)，且肾脏 CTGF及 TGF— B 阳性表达相对面积较糖尿病组明显下调 (P0．01)。结论 早期应用知芪益肾汤对STZ诱导的糖尿 病大 鼠有肾保护作用。 【关键词】 糖尿病肾病 ；知芪益。肾汤；转化生长因子 13(TGF—p，)；结缔组织生长因子(CTGF) 糖尿病 (DM)患者30％～40％可发生糖尿病肾病 (DN)。 酰甘油、血肌酐。 细胞外基质 (ECM)在肾小球系膜区及 问质的进行性积聚是 2．2 观察指标及其检测方法 给药 8周后测空腹血糖；检 DN发生的重要环节，从而导致肾小球纤维化硬化 。近年 测糖化血红蛋白，血胆固醇、三酰甘油、血肌酐，检测 24h尿 来转化生长因子 13(TGF一13)和结缔组织生长因子 (CTGF) 微量 白蛋白、计算 内生肌酐清除率 (Cer)，尿 白蛋白排泄率 的介导作用已引起广泛的关注，认为其可能为 DN发病机制 (UAER)。 的最后共同通路。 2．3 免疫组化检测 取固定好的石蜡切片，常规脱蜡、水化， 1 材料 用3％H0 室温 15rain灭活内源性过氧化物酶、微波加复合 1．1 主要药物和试剂 二月龄雄性 Wistar大 鼠60只(体质 蛋白酶修复暴露抗原，滴加正常免血清封闭液，室温 10min 量 180 ～220g)，链尿佐菌素 (STZ)(美国sigma公司生产)、 滴加稀释的一抗 (1：100)4~C过夜，滴加生物素化二抗 37~C 兔抗大鼠TGF一13。及 CTGF多克隆抗体 (santacruz公司产 15rain，DAB显色，苏木素轻度复染脱水透明中性树脂封片， 品)、spkit即用型及DAB显色试剂盒、中药 (由黄芪、知母、山 显微镜观察。 药等组成)。 2．4 统计学分析 所有数据均采用均数 ±标准差(x±s)，采 1．2 仪器 美国邦培血糖仪、OlympusAU-1000全 自动生化 用 sPss12．o统计软件进行统计学分析，组间比较采用单因 分析仪、OlympusCH30显微镜 、德国LeicaRM2145石蜡切 素方差分析，以P0．05差异为统计学意义。 片机。 3 结果 2 方法 3．1 一般指标变化 与对照组相比，肾质量、肾脏肥大指数 2．1 模型的建立及分组给药 健康雄性 Wistar大 鼠适应性 (肾质量／体质量 )明显增加 (P0．05)；而知苠益肾汤组肾 饲养7d，禁食 12d后按60mg／kg的剂量左下腹腔一次性注 重、肾脏肥大指数则较模型组低 (P0．05)，见表 1。 射STZ诱导糖尿病模型，72h后取尾静脉血测血糖和尿糖 ，于 3．2 各组血糖、糖化血红蛋 白、胆固醇、三酰甘油的变化 模 第8周末 ，每组大鼠收集 24h尿液计量检测尿 白蛋 白定量， 型组各数值较对照组均明显升高；知芪益肾汤组较模型组明 称重后，肾脏取皮质固定于 10％中 福尔马林 中、石蜡包埋、 显降低，但仍较对照组高 (P0．O1)，见表2。 制成 4 m厚切片。大 鼠经眼内眦取静脉血测血胆固醇、三 表1 表 1各组体质理、。肾质理及肾脏肥大指数(肾质理／体质理)比较 (x-i-s) 注 ：与NC组比较 P0．O1；与 DN组比较 ，P0．01P0．05 表2 各组血糖、糖化血红蛋白、胆固醇、三酰甘油比较 (±s，mmo]／L) 注：与NC组