实验十三一期止血筛选试验.docVIP

实验十三 一期止血筛选试验 人体血管由动脉、静脉和毛细血管组成,其管壁基本结构分为内膜、中膜和外膜三层。血管壁主要 内皮细胞、平滑肌细胞和细胞外基质组成。完整的血管壁对防止出血或血栓形成具有重要作用,当血管的结构发生异常时就会引起出血或血栓形成。同时,内皮细胞在调节凝血、抗凝、纤溶和血小板等生理能方面有着重要意义。 一、毛细血管脆性试验 【目的要求】 掌握毛细血管脆性试验的方法及参考范围。 【实验原理】 毛细血管壁的完整性和脆性有赖于毛细血管的结构、功能及血小板的质和量的正常,并与某些体液因素有关。当上述因素有缺陷时,毛细血管的完整性就受到破坏。毛细血管脆性试验(capillary fragility test,CFT)或称束臂试验(tourniquer test),是一种在上臂增加血管负荷,观察前臂一定范围内皮肤新鲜出血点的方法。本试验主要反映毛细血管壁的完整性及脆性,也与血小板质和量有关。 【试剂器材】 血压计、公分尺、听诊器。 【操作步骤】 1.充分暴露患者前臂,在前臂屈侧肘窝下方划一直径为5cm的圆圈。 2.将血压计袖带缚于同侧上臂,测定血压,然后将压力维持于收缩压与舒张压之间,一般为(12～13.5)kpa（90～10O mmHg),持续8min。 3.取下血压计袖带,待血液循环恢复2min后(皮肤颜色恢复正常),计数圈内新的出血点数量。 【参考范围】 圈内新的出血点数:男性5个；女性及儿童10个。 【临床意义】 毛细血管脆性试验阳性可见于以下情况: 1.毛细血管壁异常如遗传性出血性毛细血管扩张症、过敏性紫癫、坏血病、感染性血管性紫癫。 2.血小板数量异常如原发性或继发性血小板减少性紫癫、血小板增多症。 3.血小板功能缺陷 如血小板无力症、血小板病和药物和某些疾病引起血小板获得性功能缺陷等。 4.血管性血友病。 5.其他影响毛细血管及血小板功能的疾病,如糖尿病、原发性高血压、慢性肾炎、风湿性关节炎等。 【注意事顶】 1.试验前务必仔细检查患者前臂,标出已有出血点,以免影响试验结果。 2.试验时务必光线适宜,并选择合适角度。 3.在同一上臂做此试验,两次试验应间隔至少一周以上。 4.服用抗血小板药物、病毒感染及40岁以上女性进行此试验可出现假阳性。 【实验评价】 1.本试验仅为反映毛细血管及血小板功能缺陷的一个粗略指标,其对检查毛细血管壁缺陷的敏感性险查血小板功能缺陷。 2.本试验在许多无症状的人可呈阳性,而在许多血管和血小板异常并有出血症状的患者中呈假阴性,故已被许多实验室所弃用。 二、血小板聚集实验 血小板聚集仪是对血小板的聚集功能进行检查的专用仪器。通过加入不同的诱导剂,使血小板发生聚集,以对血小板功能异常性疾病进行诊断和鉴别诊断。 【实验原理】 多数血小板聚集仪测定原理采用的是比浊法。含有较多血小板的血浆是悬浊液,浊度很高;当加入血小板诱导剂后,血小板发生聚集,散在的血小板聚集成团,使血浆浊度降低。在此反应过程中,通过反应杯的光强度发生的变化被转化为电信号记录下来,并描记出血小板聚集曲线。曲线的形态,可反映出血小板的聚集功能。 【操作步骤】 各种仪器操作方法不尽相同,应该严格按仪器使用说明书进行操作。基本过程简述如下。 1.标本及试剂的准备 (1)用被检血液制备富血小板血浆(platelet rich plasma,PRP)与贫血小板血浆(platelet poor plasmbPPP)从静脉血中顺利取得4.5mL血液,加入到含有0.5mL的130mmol枸橼酸钠溶液的塑料试管中混匀。以100Orpm离心1Omin,吸出上层PRP。将剩余血浆以200Orpm离心2Omin,吸出上层PPP。 (2)配制诱导剂最常用的诱导剂和常用浓度如下。 1)二磷酸腺苷(adenosine diphosphate ADP)5、10、20、30μmol/L。 2)肾上腺素(adrenaline)300～400μg/L。 3)胶原(collagen)10～3Omg/L。 4)瑞斯脱霉素(ristoedin)5～15g/L。 2.操作 (1)开机,仪器预温至37℃。 (2)将一定量PRP、PPP分别置于仪器专用比浊杯中,PRP杯加入搅拌磁珠。将PRP杯放入预温孔内37℃预温3min。 (3)将PPP杯放入测定孔内,按PPP键调聚集率为100%。 (4)将PRP杯放入测定孔内,立即加入一定量的血小板聚集 诱导剂,血小板发生聚集反应。测定时间多选定在4～5min。根据血小板的聚集程度和反应时间仪器逐渐描记出血小板聚集曲线。 (5)测定结束, 可以得出包括血小板聚集曲线和最大聚集率、5min有效解聚率等指标。电脑打印出测试结果。 【指标意义】 1.最大聚集率(maximal aggregation ratio,MAR)是反应血小