北极狐g-干扰素cDNA克隆、表达及活性测定.pdfVIP

生 物 工 程 学 报 Chin J Biotech 2008, September 25; 24(9): 1625-1630 Chinese Journal of Biotechnology ISSN 1000-3061 cjb@ © 2008 Institute of Microbiology, CAS CSM, All rights reserved 研究简报 北极狐γ-干扰素 cDNA 的克隆、表达及活性测定 张海玲, 柴秀丽, 罗国良, 王凤雪, 易立, 邵西群, 闫喜军 中国农业科学院特产研究所, 吉林 132109 摘 要: 为研究狐γ-干扰素的生物学活性, 应用反转录聚合酶链式反应(RT-PCR)从北极狐外周血淋巴细胞中扩增出γ-干扰素 (VuIFN-γ)cDNA 。序列分析表明VuIFN-γ cDNA 全长501 bp, 编码23 个氨基酸的信号肽和144 个氨基酸的成熟肽蛋白, 与已 发表的银黑狐和犬IFN-γ 核苷酸序列同源性为99.8%和99.4%; 氨基酸同源性均为 100%。应用原核表达系统高效表达北极狐 γ-干扰素成熟肽蛋白, SDS和Western blotting 分析表达的融合蛋白分子量约为19 kD, 以不溶性的包涵体形式存在。重 组蛋白经纯化和复性, 在Vero 和MDCK 细胞上可明显抑制VSV 病毒的复制, 并测出北极狐重组γ-干扰素的活性单位分别为 6 5 1.0×10 u/mg 和1.56×10 u/mg, 为进一步开发基因工程狐干扰素奠定基础。 关键词: 北极狐, 干扰素-γ , 抗病毒活性 Cloning, Expression and Antiviral Activity of Arctic Fox (Alopex lagopus) Interferon-γ Gene Hailing Zhang, Xiuli Chai, Guoliang Luo, Fengxue Wang, Li Yi, Xiqun Shao, and Xijun Yan Institute of Special Wild Economic Animal and Plant Science, Chinese Academy of Agricultural Sciences, Jilin 132109, China Abstract: In order to characterize the biological activity of fox ( Vulpes vulpes) interferon gamma(VuIFN-γ), We have isolated the cDNA encoding arctic fox(Alopex lagopus)VuIFN- γ. This cDNA encodes a 23 amino acid signal peptide and a 144 amino acid mature protein, which shares 99.8% or 99.4% for nucleotide identity with silver fox and canine, respectively, and 100% for amino acid identity. Expression of recombinant mature arctic fox interferon gamma (mVuIFN-γ) in bacterial system was confirmed b