Smad4在前列腺细胞增殖与凋亡中作用.pdfVIP

中文摘要 前 言 良性前列腺增生(b面俨prostatic 病，目前其发病机理尚未完全阐明。一般认为有两个必要条件：老年和有功 能的睾丸(雄激素)。随着男性进入老年期，体内各种激素水平发生变化， 破坏前列腺组织中细胞增殖与凋亡比率的平衡，使前列腺细胞增殖活性升 高而细胞凋亡水平下降，导致良性前列腺增生的发生。雄激素对前列腺的 作用是通过各种生长因子介导的，而转化生长因子一B(TGF—B)是其中最 重要的因子之一。TGF一13与它的两种受体和Smad4结合成有活性的复合 体，从细胞质转移到细胞核，阻碍细胞周期G。向S期移行，抑制细胞增殖。 Snmd4是TGF一13信息传递因子。因为它几乎能与所有活化的途径限制性 SMAD蛋白结合，并形成低聚体复合物，参与和调节TGF—B信号转导，所 以，Smad4是最重要的SMAD蛋白。 多数有关Smad4对细胞增殖的调节作用的研究都集中于恶性肿瘤。 作为一种肿瘤抑制基因，Smad4在功能丧失时，TGF—B转导被抑制，从而 促进肿瘤形成。加入Smad4后，能恢复TGF—B对癌细胞的抑制作用。与 前列腺有关的研究表明TGF—B在前列腺增生发生过程中对前列腺细胞增 殖与凋亡具有重要的调节作用。Smad4对人前列腺增生组织细胞的调节作 用国内外尚未见报道。 本研究应用流式细胞技术检测了正常人前列腺组织和前列腺增生症病 人前列腺组织中细胞的增殖率和凋亡率，并应用Western blotting技术检测 了Smad4在前列腺组织中的表达，评价Smad4与前列腺组织细胞增殖率和 凋亡率的关系，探讨Smad4对前列腺细胞生长的具体调控机理。 实验方法 本实验采用流式细胞技术检测前列腺组织中细胞的增殖率与凋亡率， 并用Western blotting技术检测Smad4在前列腺组织的表达。 1．前列腺组织中细胞的增殖率与凋亡率的检测：采用流式细胞技术 (一步法)。配制PI染色液。对每份前列腺组织标本单细胞分离，分别加 入PI染色进行荧光染色。统一用流式细胞仪进行检测，记录激发波长 488nm处的红色荧光。 Blotting 法，取等蛋白量的各样品行十二烷基硫酸钠一聚丙烯酰胺凝胶(SDS— PAGE)电泳，将分离胶蛋白带电转印至硝酸纤维素膜上，分别进行一抗、二 抗孵育；3)蛋白显色及定量分析：对上述硝酸纤维素膜经UVP扫描成像，通 过计算曲线下面积得到定量积分光密度数据。 统计软件包进行处理。两独立样本的比较采用t检验，相关性采用 Spearman秩相关分析，P0．05认为有统计学意义。 实验结果 1、细胞增殖率和凋亡率的检测：正常前列腺组织的细胞增殖率为2．02 义(P0．05)，凋亡率相比，差别无统计学意义(P0．05)。 增生组织中均有表达。在正常前列腺组织中Smad4平均积分光密度值为 系数为一0．857。Smad4与凋亡率无相关性(P0．05)。 结 论 1．正常前列腺组织和增生前列腺组织中均有Smad4的表达。 2．增生的前列腺组织中Smad4的表达较正常减少。 3．前列腺中Smad4表达与细胞增殖率有关，与细胞凋亡率无关。 关键词：良性前列腺增生；Smad4 ·2· Roleof in Smad4 and of cell proliferation apoptosis prostatic