Toll样受体2和4在大鼠心肌缺血%2f再灌注损伤模型中运态表达.pdf

lIIIII IIIII II III I I I IIl Y2336582 目 录 中文摘要……………………………………………………………………·l 英文摘要……………………………………………………………………·4 英文缩写……………………………………………………………………’8 研究论文Toll样受体2和4在大鼠心肌缺血／再灌注损伤模型中的动 态表达 前言……………………………………………………………………………………………1U“ 月U舌……………………………………………………………………………………………l 材料与方法……………………………………………………………·10 结果……………………………………………………………………·25 附图……………………………………………………………………·28 附表………………………………………………………………………·36 讨论…………………………………………………………………………………一40 结论……………………………………………………………………………………………42 参考文献………………………………………………………………。43 综述Toll样受体与心肌心肌缺血／再灌注损伤的关系…………………45 致谢…………………………………………………………………………·56 个人简历……………………………………………………………………一57 中文摘要 To lI样受体2和4在大鼠心肌缺血／再灌注损伤模型中的动态表达 摘 要 目的：心肌缺血／再灌注损伤(myocardialischemic／reperfusioninjury， MI／RI)是指心肌组织缺血一段时间，当血流重新恢复后，组织的损伤程 度不仅没有减轻反而较缺血时进一步加重、器官功能进一步恶化的综合 征。局部和全身的炎症反应为心肌缺血／再灌注损伤的特征，进一步可能 发展为组织损伤并严重影响左心室功能。越来越多的实验研究证明心肌缺 血／再灌注是一组慢性炎症疾病。近年来发现Toll样受体在炎症反应中的作 用越来越重要，与缺血／再灌注损伤的关系越来越紧密。本实验旨在通过 receptor2， 观察大鼠心肌组织缺血／再灌注急性期Toll样受体2(Toll．1ike TLR2)和4(Toll．1ikereceptor 表达，探讨TLR2和TU洱的相互关系及各自在心肌缺血／再灌注损伤中的作 用。 方法：选择体重相似的雄·|生Wistar大鼠42只，根据再灌注时间不同分 醉大鼠后固定于鼠台，在呼吸机辅助呼吸的前提下，开胸挤出心脏，结扎 前降支主干，建立大鼠心肌缺血模型，缺血lh后，再次开胸，在胸腔内用 显微外科剪剪开结扎线，建立再灌注模型，再灌注达到预期时间后，再次 麻醉大鼠，固定于鼠台上，分离颈部皮肤及皮下组织，露出气管并进行气 管插管，然后分离出右侧颈总动脉并插管备用。开胸分离出心脏，原位结 扎前降支。从颈总动脉注入约1～1．5mL酞菁蓝溶液，可见到心脏部分变蓝， 立即剪下心脏，用冰盐水冲洗干净后放于干净培养皿内，置于冰箱内约 唑(2，3，5．Triphenyltetrazolium 描图像并保存，用图像分析软件分析缺血面积及梗死面积，并根据结果计 算缺血范围及梗死范围。 再选择同样体重范围的雄性Wistar大鼠84只，随机分为缺血／再灌注组 中文摘要 建立后，在达到预定时间点后开胸分离出心脏，从主动脉弓水平剪下一心脏， 用冰生理盐水冲洗干净后置于干净培养皿中，于冰箱预冷约8min，取出后 弃去心尖部及心底部，将心脏切成厚度约2ram的心肌切片，其中一片放入 包埋框进行石蜡包埋后切片染色，染色包括HE染色和免疫组化染色。另 外的心肌切片去除右室后，按缺血梗死区及室间隔分别装入不同的冻存管 内，置于液氮中lh后存于冰箱中，待以后研磨提取RNA及PCR。实时定量