子宫内膜癌组织中CD-%2c44-基因内含子9、外显子V-%2c6-的检测及其临床意义的论文.pdfVIP

8例，透明细胞癌2例;手术一病理分期I期19例，11期7例， 111期5例;组织学分级G,II例，G=7例，G;3例;伴深肌层浸润 10例;伴淋巴结转移5例;腹腔细胞学检查阳性4例。 二、主要试剂 CD,;内含子9，外显子V6及内参照引物均由北京奥科生物有 限责任公司合成;提取总RNA的TRIM试剂由美国Promega公 司提供;逆转录和PCR扩增所需的酶及其它试剂由大连宝生物 公司等 (TaKaRa公司产品)提供;电泳用琼脂糖由沈阳联星生 物公司提供。 三、方法 1、总RNA提取:采用TRIzol一步抽提法。RNA纯度采用 WFH-202型紫外透射仪测定OD值，OD260/280值为1.84-1.900 2、逆转录合成。DNA:在 10川反应体系中分别加入样本 RNA1[l;Buffer(x2)5[l;MgS04(2mmol/L)2[l;dNTPs (l0mmol/L)0.5[l;RNase(40u/[1)0.25[l;BcaBESTPolymerase 0.5[l,OligodT(50[mol)0.5[l,ddH,O0.7581，以90C 孵育 3min,420C30min合成cDNAo 3,PCR扩增和产物分析: CD44基因内含子9、外显子v。序列、R2-