预混料中木聚糖酶和植酸酶酶活测定新方法.docVIP

预混料中木聚糖酶和植酸酶酶活的测定新方法 摘 要: 本试验选用六和预混料样品, 添加定量的KDN自产全细胞酶或植酸酶, 利用 DNS 法对比不同方法测得的酶活。结果表明: 在稀释酶缓冲液中添加 6%的DETA·2Na, 可以明显提高预混料中木聚糖酶或植酸酶的酶活测定值; 采用一次性稀释到位酶样品比分级稀释测得的木聚糖酶或植酸酶的酶活值明显提高。 关键词: 预混料; 木聚糖酶; 植酸酶; 酶活 饲用酶制剂既能提高饲料的消化率和利用 率, 提高畜禽生产性能, 又能减少畜禽排泄物中 的氮、磷排泄量, 使自然环境中的水体和土壤免 受污染, 因而饲用酶制剂作为一类高效、无毒副 作用、环保型的“绿色”饲料添加剂, 在 21 世纪有 着十分广泛的应用前景。但是, 酶制剂在饲料、预 混料中的酶活测定方法还不成熟, 有些酶由于添 加剂量小及饲料中各种干扰因子如重金属离子 等影响, 实验室测定非常困难, 酶活测定结果变 异较大。本试验在预混料中添加以木聚糖酶为主 的全细胞复合酶或植酸酶, 通过不同方法分别测 定预混料中的木聚糖酶酶活和植酸酶酶活, 目的 是探讨预混料中酶活测定的优化条件, 从而为预 混料中酶活的检测提供新思路, 为建立一种相对 统一的检测方法提供参考。 1 材料与方法 1.1 供试酶制剂 木聚糖酶: 由康地恩集团以黑曲霉固体发酵 生产, 以木聚糖酶为主的全细胞复合酶; 植酸酶: 由康地恩集团生产的颗粒植酸酶制 剂 5 000u/g。 1.2 预混料 由山东六和青岛和美饲料有限公司提供。分 别为青岛和美 LC633P 蛋鸡 5%、LC15 蛋鸡 5%、 BC15 肉 小 鸡 5% 、BC35 肉 大 鸡 5% 、SB345 猪 4%、SB44P 猪 4%、LH660 猪 4%、EV24 鸡 4%、 BV15 肉 鸡 0.4% 、DV14 鸭 0.4% 、BV24 肉 鸡 0.4%。 1.3 酶活定义 木聚糖酶: 根据山东六和农牧科技园企业标 准 Q/SLH002- 2006, 酶样品于 40℃, pH 5.0 条件 下, 1min 水解木聚糖生成相当于 1μg 木糖还原物 质, 即为 1 个酶活力单位。 植酸酶: 根据 GB/T 6682- 1992, 样品在植酸 钠浓度为 5.0mmol/L、温度 37℃、pH 值 5.5 的条件 下, 1min 从植酸钠中释放 1μmol 无机磷, 即为一 个植酸酶活性单位。 1.4 试验设计 1.4.1 试验分两部分, 一部分选择预混料添加 KDN 全细胞酶, 采用不同优化办法进行木聚糖酶 酶活比较; 另一部分选择预混料添加植酸酶, 采 用不同优化办法进行植酸酶酶活比较。试验设常 规对照, 即直接测定酶制剂样品的木聚糖酶酶活 或植酸酶酶活, 作为 100%绝对酶活与在预混料 中测定酶活进行比较。 简要试验方案如下: 常规 ( 对照组): 1g 酶→溶解定容至 100mL (稀释缓冲液)容量瓶…… 试验 组 : 0.1g 酶+5g 预 混 料 混 匀 (LC633P、 LC15、BC15、BC35)→溶解定容…… 试 验 组 : 0.1g 酶 +4g 预 混 料 混 匀 (SB34、 SB44P、LH600、EV24)→溶解定容…… 试验组: 0.1g 酶+0.4g 预混料混匀(BV14、DV 鸭、BV 肉鸡)→溶解定容…… 2 结果与分析 2.1 各种预混料中添加 KDN 全细胞酶后木聚糖 酶酶活测定结果 表 1 各种预混料中添加 KDN 全细胞酶后 测定木聚糖酶酶活 样品 KDN 全细胞酶+LC633P 蛋鸡 5% KDN 全细胞酶+LC15 蛋鸡 5% KDN 全细胞酶+BC15 肉小鸡 5% KDN 全细胞酶+BC35 肉大鸡 5% KDN 全细胞酶+SB34 猪 4% KDN 全细胞酶+SB44P 猪 4% KDN 全细胞酶+LH600 猪 4% KDN 全细胞酶+EV24 鸡 4% KDN 全细胞酶+BV14 肉鸡 0.4% KDN 全细胞酶+DV 鸭 0.4% KDN 全细胞酶+BV 肉鸡 0.4% KDN 全细胞酶 由表 1 测定酶活结果可知, 大多数预混料中 木 聚 糖 酶 活 实 际 测 定 值 都 集 中 在 655 561～ 766 105u/g 之间, 实际测定酶活结果表明仍有 0.3%～15%的酶活没有测定出来。 2.2 LC633P 蛋鸡 5%预混料中添加 KDN 全细胞 酶酶稀释缓冲液中是否添加 EDTA·2Na 对木聚 糖酶酶活的测定比较 表 2 LC633P 蛋鸡 5%预混料中添加 KDN 全细胞酶木聚糖酶酶活测定结果 样品 酶活 u/g % 是否添加 EDTA·2Na KDN 全细胞酶+LC633P 蛋鸡 5% 570283 85.12 是 KDN 全细胞酶