新生儿肺炎链球菌分离株头孢菌素耐药与pbp2B、murM基因突变研究.pdfVIP

维普资讯 临床检验杂志2008年第26卷第3期 ChineseJournalofClinicalLaboratoryScience，2008，Vo1．26，No．3 179 文章编号：1001—764x(2008)031792 中图分类号：R446．5 文献标识码：A ·实验研究 · 新生儿肺炎链球菌分离株头孢菌素耐药与 pbp2B、 murM基因突变研究 承晓京，范燕燕，周惠娜 ，郑亚芬(常州市妇幼保健院，江苏常州213003) 摘要：目的 了解分离 自新生儿的肺炎链球菌pbp2B、murM基因突变状况与头孢菌素耐药情况。方法 用 PCR法检测8株 肺炎链球菌pbp2B、mnrM突变基因。结果 8株肺炎链球菌均检 出pbp2B突变基 因。mnrM基因获得3种不同的序列，与美 国国立生物信息中心(NCBI)已登录的序歹】均不同。结论 pbp2B突变基因并不一定导致头孢菌素耐药，mnrM基因突变可致 青霉素高水平耐药和头孢菌素耐药。 关键词：新生儿；肺炎链球菌；头孢菌素；耐药基因 肺炎链球菌 (Streptococcuspneumoniae)是儿童 CTGATCAGAATAAGTCTG一3，产物长度 1345bp。 呼吸道感染的常见病原菌，国内己出现头孢菌素类 murM 内套 P3：5一TTCAAACGAAAGTAGTACAAT— 抗菌药物耐药株 ¨。J。为了解分离 自新生儿的头孢 AG．3，P4：5．cTGAAAcTc1Trcm cGTGAG_3，产物 菌素耐药肺炎链球菌的相关耐药基因突变状况，我 长度 1315bp。各种靶基因PCR扩增体系均为：每 们进行了与青霉素耐药相关的青霉素结合蛋 白2编 反应体 系 P1、P2引物各 0．5 I．~mol／L，KC110 码序列pbp2B基因和与头孢菌素耐药相关的murM mmol／L，(NH4)2SO48mmol／L，MgC122mmol／L， 基因检测，现报道如下。 Tris—HC1(pH9．0)10mmol／L，NP4O 0．5％，BSA0．2 1 材料与方法 L，TaqDNApol1U。总反应体积20 l(其 中模板 1．1 菌株来源、鉴定与药敏试验 8株肺炎链球菌 液51)。热循环参数，pbp2B：93℃预变性 2min， 均为本院2005年 10月至2006年 1月分离 自新生 然后93℃ 60S，55℃ 60S，72℃ 60S，循环 35周 儿呼吸道感染患者气管分泌物，菌株编号为35—41 期，最后一个72℃延长至5min；murM：93℃预变性 及44。标本采集后及时接种于血平板，置 5％CO 2min，然后 93℃30S，55℃ 30S，72℃60S，循环 培养箱内培养 18—24h，根据菌落特征，镜下形态， 35周期，最后一个 72℃延长至5min。耐药基因检 奥普托欣(Optochin)试验，胆汁溶菌试验鉴定确认。 钡4试剂盒、靶基 因PCR引物序列和阳性对照 DNA 药敏试验按 NCCLS制定的苛养菌药敏试验法采用 由无锡市克隆遗传技术研究所提供。测序为双脱氧 K．B纸片扩散法及E．test法。抗菌药物敏感性判定 末端终止法在美 国ABI公司3730仪上进行。 依据2005版 NCCLS判定标准 。质控菌株为 ATCC 2 结果 49619肺炎链球菌。 1 g苯唑西林纸片抑菌环8株肺炎链球菌在6 1．2 菌株DNA模板制备 挑取单个菌落置入内含 — 10mm之间，筛选青霉素耐药。E试验显示8株肺 50 l裂解液(0．5％非离子去污剂配制的浓度为 炎链球菌青霉素均耐药，MIC≥2—16 g／rnl。2株 200ng／ml蛋 白酶 K溶液)的0．5ml离心管内，置 (4o，41号菌株)肺炎链球菌头孢噻肟，头孢 曲松敏 55℃水浴消化 1h，改置 95℃水浴灭活 10min。 感、MIC≤0．5 ml；其他6