黄花蒿化感物质对小麦体内酶活性影响研究.pdfVIP

黄花蒿化感物质对小麦体内酶活性影响的研究 吴根土，张静，郑胡杰，李迪，吴朱萍，姚攀龙 甘肃农业大学草业学院，兰州（730070 ） 摘 要：本文以小麦为受体植物，测定了黄花蒿提取物对受体小麦体内几种酶的活性影响， 研究了黄花蒿浸提液对受体小麦的化感作用机理。结果表明：黄花蒿化感物质可抑制小麦受 体内多酚氧化酶（PPOD ）、超氧化物歧化酶（SOD ）、过氧化物酶（POD ）、过氧化氢酶 （CAT ）等酶的活性,但可提高苯丙氨酸解氨酶（PAL ）的活性。在黄花蒿提取物的浓度 0.25g/ml 下，对上述四种酶活性抑制率分别为43.919% 、21.839% 、21.114% 、 39.796% 和 -10.299%。 关键词： 黄花蒿; 化感物质; 小麦; 抗性酶. 植物化感作用是植物或微生物的代谢活动对环境中其他植物或微生物所产生的有利或 不利的作用[1，2] ，植物主要是通过茎叶挥发、茎叶淋溶、根系分泌以及植物残株的腐解等途 径向环境中释放化感物质，来影响周围植物的生长和发育[3]。 关于化感物质的作用机制已经有了很多的研究结果[4，5] ，发现化感物质能影响植物生理 生化过程的每一个方面，但大多数化感物质是影响植物的细胞膜、能量产生和能量消耗过程 [6～8] [9] ，一部分化感物质还影响到特定酶活性和酶功能 。 本论文对黄花蒿的化感作用和化感作用机理进行了研究，旨在充分利用植物间的化感作 用来防除田间杂草，为开发天然除草剂,有效合理利用资源,发展可持续农业提供理论依据 [10] 。 1 材料与方法 1.1 供试材料 供试材料黄花蒿植株采于 2004 年秋季甘肃礼县乔川乡，经阴干后粉碎，常温避光保存。 受体植物小麦（Triticum aestivum L ）选用室内盆栽 15 天后的植株。 1.2 试验方法 将一定量的经粉碎处理的黄花蒿材料，加 12 倍的蒸馏水于 20 ℃培养箱中浸提24 小时， 浸提液抽滤过滤。 用上述抽滤液配制成 1 ⅹ、2X 、4X 、8X、16X 倍溶液分别喷洒处理受体小麦植株，处 理后于 12h，24h ，36h，48h ，60h 分别进行采样，冷冻保存。 1.2.1 过氧化氢酶（CAT ）活性测定 称取 1.00g 叶片，加入5ml 0.05mol/L pH7.8 的磷酸缓冲液(含 1%PVP)，充分研磨，4000r/min 离心 15min，定量吸取上清液。反应体系50～100uL 酶液+1.5 磷酸缓冲液+1.0ml 蒸馏水。 比色前加入0.03mol/L 的双氧水 0.5ml，在 240nm 下比色，加入时开始记时，反应进行 5min 后纪录数据。 1.2.2 过氧化物酶（POD ）活性测定 取不同小麦幼芽 1.00g，剪碎置于研钵中，加 5ml 0.1 mol/L Tris-HCl 缓冲液（pH8.5 ）， 研磨成匀浆，以 4 000r/min 离心 5min，倾出上清液，必要时残渣再用 5ml 缓冲液提取一次， 合并两次上清液，保存在冰箱（或冷处）备用。 -1- 取光径 1cm 比色杯 2 个，向其中之一加入上述酶液 0.1ml （如酶活性过高可稀释之）， 再加入反应混合液 3ml，立即开启秒表记录时间；而向另一比色杯中加入 0.2 mol/L 磷酸缓 冲液（pH6.0 ），作为零对照。用分光光度计在470nm 波长下测定反应 2min 时的光密度值。 以每分钟光密度变化（以每分钟OD470nm 变化0.01 为 1 个活力单位）表示酶活性大小，即 ∆O470nm 过氧化物酶活力 min ⋅mg(FW) 1.