小麦抗叶锈基因Lr45的一个新分子标记.pdfVIP

小麦抗叶锈基因Lr45 的一个新分子标记1 闫红飞，刘春燕，高士刚，杨文香，刘大群 河北农业大学植物病理系，河北省农作物病虫害生物防治工程技术研究中心，河北保定 （071001 ） 摘 要：目的建立小麦抗叶锈基因Lr45 SCAR(sequenced characterized amplified region 序列 特征扩增区域)标记。方法 以小麦抗叶锈病基因材料TcLr45和感病材料Thatcher为亲本，利 用黑麦基因组特异的RAPD标记引物OPH20进行PCR扩增，对获得的与预期大小相同的1.5kb 的特异片段进行克隆测序，并根据该序列设计一对特异PCR 引物LRYR 和LRYF ，对 TcLr45×Thatcher F2 代单株构建的分离群体进行扩增，验证该标记与Lr45 的连锁关系， Mapmaker 3.0软件绘制遗传连锁图。结果 该标记在TcLr45 中扩增出单一条带，片段大小为 1272 bp(命名为Ypsc20H ) ，而在感病亲本中则无扩增条带。F 代分离群体进行连锁分析， 1272 2 遗传距离为8.2 cM ，该标记为与Lr45 连锁的SCAR标记。结论 将Lr45 的RAPD标记转化成 SCAR标记。 关键词：黑麦；抗小麦叶锈基因；Lr45 ; SCAR 标记 0 引言 【研究意义】由小麦叶锈菌（Puccinia triticina ）引起的小麦叶锈病是世界性的一种真菌 病害，严重发生时可造成10%~65%的产量损失[1] 。培育小麦抗叶锈品种被认为是防治小麦叶 锈病害的最为经济有效和环境安全的方法。因此，寻找与小麦抗叶锈性基因紧密连锁的稳定 的PCR分子标记是一项重要的工作，它将为抗叶锈基因的快速鉴定及品种筛选提供依据。【前 人研究进展 [2] 】黑麦属(Secale cereale) 作为小麦的第三级基因源 ，是改良小麦抗病性、品质 和产量等性状的重要外源基因供体，通过染色体工程方法结合常规育种可以将黑麦基因导入 小麦，丰富小麦的遗传变异。Flavell[3]等报道在谷类作物中黑麦重复序列的含量最高，高达 92%，其中30%为黑麦基因组特异重复序列[4] 。目前，已有用RAPD标记来鉴定小麦中的黑 麦成分的报道。Iqbal[5]等用RAPD来鉴定1RS/1BL易位系，Brunell[6]等用RAPD来鉴定2RS/2BL 2RL/2BS易位系，Gallego[7]等用RAPD来鉴定小麦-黑麦的附加系，Ko[8]等建立了黑麦特异重 复序列的RAPD标记。 小麦抗叶锈病基因Lr45发现于日木小麦与黑麦( Secale cereale) 的杂交后代中，并被定位 于2A染色体上[9]，为2AS-2R#3S•2R#3L易位，其短臂为普通小麦2A染色体和黑麦2RS易位， 长臂为黑麦2RL 。到目前为止，该基因仍表现出优越的抗叶锈性，是具有应用潜力的抗叶锈 基因。 【本研究切入点】关于该基因的分子标记，张娜等分别利用AFLP[10]与SSR[11]技术获 得了该基因的分子标记，但这两个标记所获得片段具有片段小的共同缺点，均未能转化成更 为稳定、使用简便的SCAR或STS标记。本研究即利用Ko[8]等建立的黑麦特异重复序列的 RAPD标记引物对含有由黑麦向小麦转移的抗叶锈基因Lr45 的外源染色质的TcLr45材料进 行扩增，以期获得TcLr45 的RAPD标记，并将该标记转化为更为稳定的SCAR标记。 【拟解 1本课题得到基金项目：河北省自然基金项目（c2006000438 ）；高校博士基金（20050086002 ）的资助。 - 1 - 决的关键问题】建立小麦抗叶锈基因Lr45 的稳定地SCAR标记，使该标记不仅用于检测小麦- 黑麦杂合体中的异源染色质成分，而且还可以证实黑麦含有的抗叶锈基因向小麦转移的事 实。 1 材料和