里氏木霉内切_葡聚糖酶_基因在毕赤酵母中表达及酶学性质的研究.pdfVIP

菌 物 学 报 23 （3 ）：388~396, 2004 Mycosystema 里氏木霉内切- β-葡聚糖酶II 基因在毕赤酵母中的表达及 酶学性质研究 乔 宇 毛爱军 何永志 刘伟丰 董志扬 （中国科学院微生物研究所北京 100080 ） 摘 要：采用外显子拼接的方法，以里氏木霉Trichoderma reesei 基因组 DNA 为模板，克隆出 内切-1,4- β-D-葡聚糖酶II 基因 egl2 的全编码序列，将其插入巴斯德毕赤酵母Pichia pastoris 表达载体pPIC9K 中，并位于 α-因子信号肽序列的下游，获得重组质粒pQY2025 。重组质粒 线性化后用电穿孔法导入毕赤酵母Pichia pastoris 菌株GS115 中，经大量筛选，获得高效分泌 表达内切葡聚糖酶II 的毕赤酵母工程菌株Gp2025 。用甲醇诱导培养基进行摇瓶发酵，培养基 中内切葡聚糖酶II 的活力可达1573.0U/mL，同时对重组内切葡聚糖酶II 的性质进行了初步研 究。 关键词：纤维素酶,