同时检测六种人类冠状病毒的单管多重RT-PCR方法的建立.pdfVIP

416· ．检验技术． 同时检测六种人类冠状病毒的单管多重 RT—PCR方法的建立 牛培华 张晨 陆柔剑 王佶楼永良谭文杰 马学军 【摘要】 目的建立一种单管多重RT—PCR检测方法，同时检测6种人类冠状病毒。方法由 MERS·CoV)的核苷酸序列作为参比，分别设计6种冠状病毒保守区靶序列特异性引物，用本实验室 所保存的病毒株及核酸样本为模板建立基于全自动电泳仪分析的单管多重RT—PCR检测技术，进行 了检测限和重复性评价，并用本实验室所保存的其他呼吸道病毒阳性样品对该方法的特异性进行了 再验证。用140份临床样本结合荧光定量RT—PCR法平行验证了该检测方法的可行性。结果基于 全自动电泳仪分析的多重RT—PCR检测技术可同时检测6种人类冠状病毒，阳性标本均显示至少一 条相应特异性产物预期大小片段(分别为195、304、332、378、415、442 bp)，阴性对照无特异性条带显 示，具有较高的特异性。在检测单个病毒时检测限能达到1．