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第八章 免疫学应用 第一节 免疫学检测 一、抗原或抗体的检测 （一）抗原、抗体反应的特点与影响因素 1. 抗原、抗体反应的特点 特异性 可逆性 可见性 2.抗原、抗体反应的影响因素 电解质 酸碱度 温度 （二）抗原-抗体反应的基本检测方法 1.凝集反应 （agglutination） 定义：细菌、红细胞或表面带有抗原的乳胶颗粒等都是不溶性的颗粒抗原，当与相应抗体结合，抗原与抗体结合形成凝集团块，即称为凝集反应。 1．直接凝集（direct agglutination）：将细菌或红细胞与相应抗体结合产生的细菌凝集或红细胞凝集现象。 可用于传染病诊断如肥达氏反应（Widal reaction）诊断伤寒病。或利用血细胞凝集现象检查血型。 2．间接凝集（indirect agglutination）：用可溶性抗原包被在乳胶颗粒或红细胞表面，与相应抗体混合出现的凝集现象。 如用γ球蛋白包乳胶颗粒检测类风湿关节炎病人血清中的类风湿因子，用甲状腺球蛋白包被乳胶颗粒用于检测甲状腺球蛋的抗体。 也可以将抗体吸附到乳胶颗粒上检查临床标本中的抗原，如细菌或真菌性脑膜炎抗体包被的乳颗粒，一旦与含有相应抗原的脑脊液混合，便可发生凝集。 2. 沉淀反应 （precipitation neaction） 定义：可溶性抗原与抗体结合，在两者比例合适时，可形成较大的不溶性免疫复合物。在反应体系中出现不透明的沉淀物，这种抗原抗体反应称为沉淀反应。 （1）单向免疫扩散 （single immunodiffusion） 在凝胶中进行的沉淀反应。 将抗体混入加热溶解的琼脂中，倾注于玻片上，制成含有抗体的琼脂板，在适当位置打孔，将抗原材料加入琼脂板的小孔内，让抗原从小孔向四周的琼脂中扩散，与琼脂中的抗体相遇形成免疫复合物。当复合物体积增加到一定程度时停止扩散，出现以小孔为中心的圆形沉淀圈，沉淀圈的直径与加入的抗原浓度成正相关。 本方法简便，易于观察结果，可测定抗原的灵敏度（最低浓度）约为10～20μg/ml，常用于定量测定人或动物血清IgG、IgM、IgA和C3等。 （2）双免疫扩散试验  （double immunodiffusion） 在琼脂板上按一定距离打数小孔，在相邻的两孔内分别放入抗原和抗体材料。 当抗原和抗体向四周凝胶中扩散，在两孔间可出现2～3条沉淀线。 本法常用于抗原或抗体的定性或定量检测，或用于两种抗原材料的抗原相关性分析。 （3） 免疫电泳 (immunoelectrophoresis) 分成两步，即先进行电泳，再进行琼脂扩散。 先将样品加入琼脂中电泳，将抗原各成分依电泳速度不同而分散开。然后在适当的位置上沿电泳方向挖一直线形槽，于槽内加入含有针对各种抗原混合抗体液，让各抗原成分与相应抗体进行双向免疫扩散，可形成多答卷沉淀线。 此法进行血清的蛋白种类分析。对于免疫球蛋白缺损或增多的疾病的诊断或鉴别诊断有重要意义。 3. 补体参与的反应 溶血反应（hemolytic assay）、 补体介导的细胞毒试验（complement mediated cytotoxicuty test） 补体结合试验（complement fixation test）。 4.用标记抗体或抗原 进行的抗原、抗体反应 （1）免疫荧光技术（immunofluorescence techni） 是用化学方法使荧光素标记的抗体（或抗原）与组织或细胞中的相应抗原（或抗体）结合，进行定性定位检查抗原或抗体的方法 （2）酶免疫测定 （enzyme immunoassay,EIA） 将抗原抗体反应的特异性与酶对底物高效催化作用结合起来，根据酶作用底物后显色，以颜色变化判断试验结果，可经酶标测定仪作定量分析。 常用于标记的酶有辣根过氧化物酶(horseradish peroxidase)、碱性磷酶（alkaline phosphatase）等。 它们与抗体结合不影响抗体活性。这些酶具有一定的稳定性，制成酶标抗体可保存较长时间。 常用的方法有酶标免疫组化法和酶联免疫吸附法。前者测定细胞表面抗原或组织内的抗原；后者主要测定可溶性抗原或抗体。 夹心法（sandwich assay）:将已知的特异抗体包装在固相载体（塑料板凹孔或纸片上），加入待检标本，标本中的抗原即可与载体上的抗原结合，洗去未结合的材料后加入该抗原的酶标记抗体，洗去未结合的酶标抗体，加底物显色，用酶免疫检测仪测量颜色的光密度。 可定量测定抗原。 间接法（indirecr ELISA）：常用于检查特异抗体。 先将已知特异抗原包被固相载体，加入待检标本（可能含有相应抗体），再加入酶标抗Ig的抗全（即第二抗体），经加底物显