H5N1亚型禽流感病毒HA部分基因的克隆与可溶性表达.pdfVIP

中国动物检疫 2010年第 27卷第 3期 一36一 H5N1亚型禽流感病毒 HA 部分基因的克隆与可溶性表达 庞学敏 ，郭伟伟 ，李明义 ，黄保续 。 (1东北农业大学动物医学院，黑龙江哈尔滨 150030； 2青岛易邦生物工程有限公司，山东青岛，266032； 3中国动物卫生与流行病学中心，山东青岛 266032) 摘 要：本研究根据 Genbank中记录的禽流感H5N1亚型HA基因序列，设计 了一对特异性引物，提取禽流感 H5N1亚型病毒RNA，并利用一步法RT—PCR方法扩增 HA部分基 因，与pMD18-T载体连接克隆扩增并鉴定后提取质粒 与 32a质粒同时分别双酶切并进行连接克隆扩增，提取重组质粒后转入 E．coliRosetta细胞中进行原核表达，通过 检测证明得到了可溶性表达，大小约为35kD左右。从而为