Akt在表皮细胞生长因子诱导人乳腺癌细胞趋化运动中作用的研究.pdfVIP

Akt 在表皮细胞生长因子 诱导的人乳腺癌细胞趋化运动中的作用研究 1 王静娜，张宁 北京大学化学与分子工程学院化学生物学系，北京(100871) E-mail: nzhangchina@ 摘要 目的 研究 Akt/PKB 在表皮生长因子受体诱导的人乳腺癌细胞的趋化运动中的作用。 方法 通过 Akt 抑制剂 （Akt inhibitor Ⅲ）抑制人乳腺癌细胞中 Akt/PKB 的活性，通过滤膜 小室法 (Mircro-Boyden Chamber) 检测细胞的趋化运动能力的变化，通过细胞黏附实验检测 细胞的黏附能力的变化。实验结果表明，抑制了细胞中 Akt/PKB 的活性，有效的抑制了表 皮生长因子受体诱导的人乳腺癌细胞的趋化运动和黏附。结论 Akt/PKB 在表皮生长因子受 体诱导的人乳腺细胞的趋化运动和黏附过程中起着重要的作用。 关键词 Akt/PKB 表皮生长因子受体 乳腺癌 趋化运动 细胞黏附 中图分类号：R737 1. 引 言 Akt/PKB 是在 20 世纪 90 年代初发现的一种原癌基因[1,2,3] ，目前研究发现人体中有三种 亚型：Akt1/ PKBα，Akt2/PKBβ，Akt3/PKBγ[4] 。Akt/PKB 是人体中一种重要的 Ser/Thr 蛋白 激酶，是 PI3K 的下游信号分子[5,6](如图 1)，体外调控生长因子介导的细胞生长，细胞增殖 [6]，体内参与肿瘤的形成。在多种肿瘤细胞中发现有 Akt/PKB 的过表达 以及细胞存活等过程 [7] [8] 或者活性增强 。同时近年的研究发现Akt/PKB 在细胞的迁移过程中也发挥着重要的作用 ， 但是对于其在细胞运动过程中的具体作用，研究的还比较少。本文以人乳腺癌 MDA-MB-231 细胞为模型，通过 Akt/PKB 的特异性抑制剂探讨了Akt/PKB 在表皮生长因子受体诱导的人 乳腺癌细胞的趋化运动和黏附过程中的作用。 图 1. Akt/PKB 的活化。G 蛋白偶联受体（GPCR ）或者生长因子受体（RTK ）与其配体结合被活化后，活化 下游的 PI3K ，PI3K 特异的将 PIP2 磷酸化生成 PIP3 ，PDK 1 与 PIP3 结合后活化，Akt/PKB 与 PIP3 结合定位 到细胞膜上，再被 PDK 1 磷酸化后活化。 —————————— 1本课题得到高等学校博士学科点专向科研基金（20040001019 ）资助。 - 1 - 2. 材料和方法 2.1 MDA-MB-231 细胞的培养和传代 人乳腺癌 MDA-MB-231 细胞购自美国细胞菌种库 (American Type Culture Collection, ATCC) (Manassas, VA, USA) ，来源是人乳腺器官，属于上皮细胞腺癌。该细胞的表皮生长 因子受体 (EGFR) 表达呈阳性，是研究 EGFR （表皮生长因子受体）诱导癌细胞转移的理 想模型。细胞培养采用加了双抗（Penicillin-Streptomycin ）和10% FCS（小牛血清）的RPMI1640 完全培养基，在37 ºC、5% CO2 的饱和湿度培养箱中培养。待细胞生长两天后用0.1%胰酶 /EDTA 消化传代。 2.2 Akt/PKB抑制剂 Akt inhibitor Ⅲ 购买自Calbiochem (La Jolla, CA)，其分子式为C H O P ，是一种PI类似 28 57 9 物，可以通过抑制Akt与PIP3 的结合而