抗黄萎病基因StVe转化番茄的研究.pdfVIP

维普资讯 园 艺 学 报 2008，35 (5)：693—700 ActaHorticuhuraeSinica 抗黄萎病基 因StVe转化番茄的研究 陈玉辉 ，赵凌侠 ，柴友荣 ，崔丽洁 ，董仲琦 ，钱虹妹 ，唐克轩 ， (上海交通大学复旦一交大一诺丁汉植物生物技术研发中心，上海200240； 上海交通大学生命科学技术学院，上海 200240； 上海交通大学农业与生物学院，上海 200240； 西南大学农学与生物科技学院，重庆400716) 摘 要：为了验证克隆自水茄 (SolanumtorvumSwartz)的＆ 基因功能，将StVe连人中间载体p35S． 2300：：gus：：noster的BamHI和SacI位点 ，取代 gus基 因构建植物双元表达载体 p35S-2300：：＆ ：： noster；用农杆菌介导法转化樱桃番茄22号，获得 了72株卡那霉素抗性植株，PCR和 Southernblot检测确 认有5株为阳性植株；RT-PCR结果显示，StVe在转基因番茄植株问的转录水平表达存在差异；PDA平板 抑菌试验显示，转 ＆ 基因番茄叶片总可溶蛋白具有抑制番茄黄萎病菌生理小种 1(Verticilliumdahliaerace 1)生长的作用。 关键词：番茄；抗病；＆ 基因；大丽轮枝菌；转化 中图分类号：S641．2 文献标识码 ：A 文章编号：0513-353X (2008)054)693-08 TransformationofTomatowiththeVerticillium dahliaeResistanceGeneStVe from Solanum torvum CHEN Yu—hui’’ ZHAO Ling—xia’’ CHAIYou—rong，CUILi-jie’’，DONGZhong—ql’，QIANHong— ， ， meiJ’’．andTANG Ke—xuan (F‘udan—SJTU—NottinghamPlantBiotechnologyRDCenter，ShanghaiJiaotongUniversity，Shanghai200240，China； SchoolofLfieScienceandTechnology，ShanghaiJiaotongUniversity，Shanghai200240，China；SchoolofAgricultureandBiol- ogy，ShanghaiJiaotongUniversity，Shanghai200240，China；CollegeofAgronomy Biotechnology，SouthwestUniversity， Chongqing400716．C ina) Abstract：InordertoverifythefunctionofStVegene (3．4kb)whichwasisolatedfrom Solanum tor- yttm，wesubstitutedtheStVegeneforgusinplasmidp35S一2300 ：：gus：：noster。andconstructedplantbina— ryexpressionvectorp35S-2300 ：：StVe ：：noster．Subsequently．theresultingvectorwasintroducedintoto— matoplantsviaAgrobacteriumtumefaciens—mediatedmethod．Intotal。weobtained72tomatoplantsresistantto kanamycinand5independenttransgenictomatoplantswereconfirmedbyPCRandSouthernblotanalysis．The fivetransgenictomatoplantswerefurtheranalyzedtheexpressionofStVegeneattranscription levelthrough semi—quantitativeone—step RT—PCR．S