PI3K%2fAkt信号通路在头部浅低温减轻大鼠全脑缺血再灌注损伤中的作用.pdf

目 录 中文摘要……………………………………………………………………1 英文摘要……………………………………………………………………4 研究论文P13K／Akt信号通路在头部浅低温减轻大鼠全脑缺血再灌注损 伤中的作用 前言……………………………………………………………………．．9日¨舌……………………………………………………………………．． 材料与方法…………………………………………………………．…9 结果…………………………………………………………………．23 附图…………………………………………………………………．25 附表…………………………………………………………………．36 讨论…………………………………………………………………．38 结论…………………………………………………………………．44 参考文献……………………………………………………………．44 综述P13列Ah／mTOR通路在氧化应激神经系统损伤的作用………．．48 致谢………………………………………………………………………．58 个人简历…………………………………………………………………．59 中文摘要 Pl3K／Akt信号通路在头部浅低温减轻大鼠全脑缺血 再灌注损伤中的作用 摘 要 目的：应用改良的四血管阻断法制备SD大鼠全脑缺血再灌注模型， 温法实施头部浅低温，观察再灌注期间大鼠海马CAl区pAkt蛋白、总Akt 缺血再灌注损伤的影响。比较单纯头部浅低温与应用LY294002后头部浅 低温对大鼠全脑缺血再灌注损伤的影响，探讨P13K／Akt信号通路在其中的 作用及机制。 方法： 1实验分组 健康雄性清结级SD大鼠60只，鼠龄3--4月，体重250～280 g，由河 北医科大学实验动物中心提供。根据研究目的采用随机数字表法将大鼠分 组0-n／R+L聊。 2动物模型制备 应用改良的Pulsinelli四血管阻断法制备大鼠全脑缺血再灌注模型， 全脑缺血时间为15min，再灌注8h，室温维持在23-25℃。大鼠称重后腹 腔注射10％水合氯醛(3．5 ml／kg)进行麻醉，之后将动物俯卧位固定于实 验台上，于颈后正中第一、二颈椎处切开皮肤，暴露双侧翼4,：fL，烧灼两侧 的椎动脉使其闭塞。24h后再用同法麻醉动物，气管插管吸氧自主呼吸， 间断吸入七氟醚维持麻醉，尾静脉置管后，静脉泵入乳酸钠林格氏液，颈 前正中切开皮肤，分离双侧颈总动脉，用4-0丝线穿过颈总动脉备用。之 后按照实验分组给予不同的处理。S组大鼠仅暴露翼dqLP}、口，分离颈总 动脉，但不烧闭双侧椎动脉，不夹闭双侧颈总动脉，观察8h。I／R组制备 全脑缺血再灌注模型，气管插管后在咽喉下放置棉球，防止误吸，立体定 位仪固定大鼠，头皮刺入电极，持续进行脑电图(EEG)监测，四肢皮下 中文摘要 刺入电极，持续进行心电图(ECG)监测。切开头皮，利用大鼠脑立体定 位仪定位，用微型颅钻在右侧海马CAl区(前囟后3．6Iilll1、中线右旁开 3mm)钻开一直径约2mrll的圆孔，置入微型温度探头监测海马温度。 HI／R+DM组在全脑缺血前20min利用大鼠脑立体定位仪经左侧脑室缓慢 注射DMSO 5山，m／IHLY组给予LY294002 中，浓度为25mmol／L)。低温组经双侧鼻腔置入24G硅胶管，深度为20 mrll，灌注5。CO．9％氯化钠溶液，实施头部浅低温，速率为100 min， 低温维持lh后自然复温。实验中直肠温度始终维持在(37．0士0．5)℃。 3样品制备和组织学检查 白表达及苏木精一伊红(髓)染色后光镜检测 再灌注8h后，每组取6只大鼠，10％水合氯醛(3．5