核包膜蛋白p62和LBR自身抗原基因克隆表达及抗体诊断胆汁性肝硬化.pdfVIP

维普资讯 医学杂志2005年 旦筮垫鲞筮!!翅 ： t 旦 ． 临床 实验 诊 断研 究 · 核包膜蛋 白gp210、p62和 LBR 自身抗原 基因克隆表达及其抗体诊断原发性 胆汁性肝硬化的价值初探 李永哲 刘镭 孙庆国 曾常茜 赵振国 佟大伟 张蜀澜 高扬 于孟学 朱立平 摘【要】 目的 克隆人核包膜蛋白自身抗原gp210、p62和LBR基 因，构建重组表达质粒，获得具免疫学活性的纯化重组蛋白，建立酶联免 疫吸附法(ELISA)，初探抗核包膜蛋白gp210、p62和 LBR自身抗体在原 发性胆汁性肝硬化(PBC)诊断中的意义。方法 构建重组表达载体，在 大肠杆菌BL21、M15中表达 ；融合蛋 白经Ni—NAT树脂柱进行亲和层析 纯化 ，并通过十二烷基硫酸钠．聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS)及免疫 印迹法 (WB)进行免疫活性鉴定；应用表达蛋白建立间接ELISA，检测60 名健康体检者、68例原发性胆汁性肝硬化(PBC)、60例病毒性肝炎、60 例结缔组织病患者血清中抗 gp210、p62和 LBR抗体。结果 经重组质 粒测序和酶切结果证实，gp210、p62和 LBR 目的基因已正确插入原核表 达载体中，基因序列正确，符合表达框架；SDS检测表达产物分别 在69000、62000和27000处有一明显的蛋白表达条带，WB分析表明重组蛋白具有人gp210、p62和 LBR抗原反应性。ELISA检测标本血清结果显示，PBC中，抗 gp210抗体、抗 p62抗体和抗LBR抗体 阳性率分别为36．8％、30．9％和5．9％；而病毒性肝炎组、结缔组织病组和健康体检组中，除抗 gp210 抗体在结缔组织病患者中阳性率为 1．7％外，3种自身抗体检测结果均为阴性。PBC组3种自身抗体 阳性率与疾病对照组及正常对照组比较 ，差异均有统计学意义(P0．05和P0．01)。结论 本研 究成功克隆人核包膜蛋白自身抗原 gp210、p62和LBR基因，并将其在大肠杆菌中成功表达。应用纯 化融合蛋白建立的ELISA检测抗gp210抗体、抗p62抗体和抗LBR抗体，对 PBC具有较好特异性。为 PBC的特异性临床诊断提供了有效的工具。 【关键词】 肝硬化，胆汁性； 自身抗原； 核包膜蛋白 Cloningandexpressionofnuclearenvelopeprotein gp210 、p62、LBR autoantigenegeneaswellas clinicalapplicationofthecorrelativeantibodiesindiagnosisofprimarybiliarycirrhosis y0 ． zhe‘．UU ，sUNQing-guo，ZENGChang-qian，ZHAOZhen-guo，TONGDa—wei，zHANGShu．1an。GA0 Yang，YUMeng- ，z日uLi-ping． DepartmentofClinicalLaboratory，PekingUnionMedicalCollege Hospital。PUMCCAMS，Beijing100730，C inaEmail：yongzhelipumch@yahoo．con,cn 【Abstract】 0bjective Tocloneandconstructthehumanplasmidcontaininggp210、p62、LBRof humanperipheralbloodmononuclearcell，thenpurifynadidentifytheimmunoreactivityoftherecombina