大蹼铃蟾皮肤膜联蛋白Ⅱ相关蛋白分离纯化及活性.pdfVIP

维普资讯 动 物 学 研 究 2005，Aug．26 (4)：404—409 CN53——1040／Q ISSN0254——5853 ZoologicalResearch 大蹼铃蟾皮肤膜联蛋 白Ⅱ相关蛋 白的分离纯化及活性 张 杰 2，韦双双 ，张 勇 ，张英霞 ，李文辉 (1．中国科学院昆明动物研究所 毒素研究室 云南 昆明 650223；2．中国科学院研究生院北京 100039) 摘要 ：通过阴离子交换、凝胶过滤和阳离子交换层析 ，从大蹼铃蟾皮肤中纯化到一个表观分子量为 33kDa 的单链蛋 白。N一末端序列比较分析显示，该蛋 白与来 自zlb~H爪蟾、红色原鸡和人膜联蛋 白Ⅱ的 N一末端序列 相同的氨基酸分别 占70％、64％和56％。该蛋白具有以钙依赖的方式抑制专一性血小板膜糖蛋白Ⅵ受体激动剂 — — stejnu1xin诱导洗涤人血小板聚集的生物学功能，最大抑制率达48％。结合其 N一末端序列 BLAST搜索结 果及其活性的钙依赖性，推测该蛋 白是与膜联蛋 白Ⅱ相关的一类蛋 白质。 关键词：两栖类；膜联蛋 白兀；大蹼铃蟾；血小板；Stejnulxin 中图分类号：Q959．5；Q51 文献标识码：A 文章编号：0254—5853(2005)04—0404—06 PurificationandCharacterizati0nofAnnexin 11 RelatedProteinfrom Bombinamaxina Skin ZHANG Jie一，W EIShuang—shuang ，ZHANG Yong ， ZHANG Ying—xia1．LEEW en—hUil， r1．DepartmentofAnimalToxicolog)，Knaming mM ofZoology，theChineseAcademyofSciences，Knaming，Yunnan 650223，China 2．GraduateSchooloftheChineseAcademyofSceinces，Beijing 100039，China) Abstract：A singlechainproteinwithanapparentmolecularweightof33kDawaspurifiedfrom skinofBombina maximabyacombinationofionexchangeandgelfiltrationchromatographysteps．N—terminalaminoacidsequencedeter— minationindicatedthatitshraes70％，46 ％ and56％ identitywiththoseofannexin ⅡrfomtheAfricanclawtoad，red junglefowlandhuman，respectively．ThepurifiedproteinrfomB．maxinainhibitsstejnulxin(aspecificplateletagonist viaplateletmembraneglycoproteinⅥ receptor)inducedplateletagrgegationinaCa“dependentmanner．Maximalinhi— bitionratereaches48％ ．BasedontheN—terminal aminoacidsequenceBAL ST searchresultsandthefactthatitsactivity isstrictlyCa¨ dependent。thepurifiedproteinmightbestructurallyandfunctionallyrelatedtotheannexinproteinfamily