家蚕丝素-RGD融合蛋白盐析纯化工艺探讨.pdfVIP

维普资讯 2007；33(1) 蚕 业 科 学 CANYE KEXUE 85 家蚕丝素-RGD融合蛋白的盐析纯化工艺探讨 李 媛 白利强 姚菊明 (浙江理工大学材料与纺织学院，教育部先进纺织材料与制备技术重点实验室，杭州 310018) 摘 要 利用基 因重组技术合成了具有良好细胞粘附活性的重组家蚕丝素一RGD融合蛋白质(SilkR·GD)，探讨 了 其盐析的工艺条件。研究发现 ，在融合蛋白等电点pH8附近，当硫酸铵在溶液中的饱和度较低 (10％)时，其蛋 白 质沉淀量随着温度的升高而增加 ；当硫酸铵的饱和度升至20％时，蛋白质沉淀量不再随着温度的变化而变化，但与 低饱和度硫酸铵时相比，沉淀量明显增加；当硫酸铵的饱和度升至30％或以上时，沉淀中杂蛋白含量明显增多，不 利于 目的蛋白的纯化。Silk—RGD融合蛋白相对合理而且易操作的盐析纯化条件为：pH8，硫酸铵在溶液中的饱和 度为20％，室温(约20℃)。利用该工艺条件 ，可以低成本、高效率地生产Silk—RGD融合蛋白，从而满足新型材料 规模化开发 的需要 。 关键词 家蚕丝素；类丝蛋白；精氨酸．甘氨酸．天冬氨酸；盐析法 中图分类号 $881．3 文献标识码 B 文章编号 0257—4799(2007)0l一0085—06 AnalysisonSalting-outPurificationoftheBombyxmori SilkFibroin．RGD FusionProtein LIYuan BAILi-Qiang YAOJu-Ming (TheKeyLaboratoryofAdvancedTextileMaterialsandManufacturingTechnologyofMinistry ofEducation，CollageofMaterialsandTextlie，ZhejiangSci一 University， Hangzhou310018， 几『a) Abstract ByapplyingofgeneticengineeringstrategiesaBombyxmolisilkfibroin—RGDfusionprotein (Silk· RGD)wassynthesize，whichshowedahighcelladhesiveability，andthetechnologicalconditionsforsalting· OUtpurificationOftheSilk—RGD werestudied．TheresultsrevealedthattheyieldOfsalting—outprecipitate in· creasedwithriseoftemperatureatthelow (NH4)2SO4concentration(1O％)underpH8ofisoelectricpoint； whenthe(NH4)2SO4concentrationincreasedto20％，theyieldwasnottemperature—dependentbutmuch morethanthatatconcentrationOf1O％；whenthe(NH4)2SO4concentrationincreasedto30％orabove，there weremanyimpuritiesintheprecipitatescausingdifficultiesforpurificationofthetargetprotein．Asaconclu— sion．itseemedthattherationalandeasyoperatingsalting．outconditionsforpurificationOfSilk．RGDwere2O％ of(NH4)2SO4atroomtemperature(around20℃)andpH8．Undertheseco