内蒙古呼和浩特地区奶牛乳房炎金黄色葡萄球菌耐药性调查的研究.docVIP

内蒙古呼和浩特地区奶牛乳房炎金黄色葡萄球菌的耐药性调查研究 王冰，刘明春，吴聪明，沈建忠* （中国农业大学 动物医学院， 北京 100094） 摘要：本文对内蒙古呼和浩特地区奶牛乳房炎发生情况及分离的金黄色葡萄球菌的耐药情况进行调查。用奶牛乳房炎诊断液来鉴别隐性和临床型乳房炎；采用肉汤微量稀释法，对从本地区12个奶牛场随机抽取的611份奶样中分离出的154株金黄色葡萄球菌对25种药物进行体外药敏试验；采用纸片法对苯唑西林耐药的菌株做耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（MRSA）测定；采用碘量法分析菌株产β－内酰胺酶的情况。其中隐性乳房炎的发病率为55.75%，乳区发病率为31.70%，金黄色葡萄球菌的分离率为26.8%；临床型乳房炎的发病率为16.07%,乳区发病率为6.28%，金黄色葡萄球菌的分离率为18.02%。154株金黄色葡萄球菌对25种常用抗菌药物总耐药率较高，其中对氨苄西林、甲氧苄啶、青霉素G、磺胺嘧啶和红霉素的耐药情况最严重，耐药率分别为100%、100%、99.35%、98.70%和95.45%。分离菌株最少耐受3种药物，最多耐受20种药物，且最主要集中于5重耐药（11.69%）、6重耐药（18.2%）和7重耐药（12.34%）。154株金黄色葡萄球菌中，仅检出3株耐甲氧西林金黄色葡萄球菌，146株产β－内酰胺酶，产酶率为94.81%。可见，内蒙古呼和浩特地区的奶牛乳房炎致病菌的耐药情况比较严重。 关键词：奶牛乳房炎、金黄色葡萄球菌、耐药性、耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（MRSA）、 β－内酰胺酶 奶牛乳房炎是造成世界范围内奶牛业损失最严重的疾病之一，仅在美国每年由奶牛乳房炎引起的损失达2亿美元[1]。尤其，隐形乳房炎不易察觉，又可在牛群中普遍流行，所以给奶牛业造成严重损失。据目前的报道，金黄色葡萄球菌与大肠杆菌、链球菌一样是引起奶牛乳房炎的重要致病菌。随着抗菌药物的广泛使用，耐药菌株逐渐发展起来，而且大量出现了多药耐药的菌株。尤其，在动物性食品加工过程中，金黄色葡萄球肠毒素不易被破坏而引起食物中毒，这样就更加威胁到生鲜牛乳的食品安全性。所以，我们对内蒙古呼和浩特地区进行了奶牛乳房炎发生调查并对临床分离的金黄色葡萄球菌进行体外药敏试验、筛选MRSA和测定产β－内酰胺酶的情况，以期为临床合理用药来预防和治疗乳房炎提供参考，并为耐药机制的研究打下基础。 1 材料与方法 1.1 材料 1.1.1 菌株 从内蒙古呼和浩特地区的12个奶牛养殖场当天所挤共611份奶样中分离。质控菌株为金黄色葡萄球菌ATCC29213，购自中国药品与生物制品检定所。 1.1.2 培养基 用于选择性筛选致病性金黄色葡萄球菌的高盐甘露醇培养基，购自杭州天和微生物试剂有限公司。 1.1.3 葡萄球菌属细菌生化鉴定管 购自杭州天和微生物试剂有限公司。 1.1.4 奶牛乳房炎诊断液 (mastitis test CMT) 购自波兰DeLaval公司 1.1.5 抗菌药物标准品 青霉素G、氨苄西林、阿莫西林、苯唑西林、头孢唑啉、头孢噻呋、———————— 作者简介：王冰（1981-），女，在读硕士研究生。 *通讯作者：沈建忠，教授，博士生导师，E-mail: sjz@cau.edu.cn 恩诺沙星、环丙沙星、氧氟沙星、诺氟沙星、红霉素、替米考星、林可霉素、克林霉素、杆菌肽、庆大霉素、卡那霉素、阿米卡星、磺胺嘧啶、甲氧苄啶、氯霉素、氟苯尼考、土霉素、多西环素、万古霉素共25种，购自中国药品与生物制品检定所和中国兽药监察所。 1.1.6 筛选MRSA所用的纸片和培养基 购自杭州天和微生物试剂有限公司。 1.2 方法 1.2.1 乳房炎检测 乳房炎检测是在每次挤奶、采样之前进行，挤奶前要对乳区进行消毒并 弃去头两把奶 ,将各乳区奶样挤入对应乳杯,分别加入等量乳房炎诊断试剂,使混合均匀 , 10～30秒内根据凝集反应程度进行判定并以颜色反应作为参考。混合液均匀 ,流动性好 , 无絮状物 ( - )；有少许絮状物或沉淀产生 (弱阳性 + )；有明显絮状物或沉淀产生 (阳性 + + )；絮状物或沉淀黏集成凝胶状或成凝胶状团块 (强阳性 + + +或 + + + + )。 1.2.2 分离纯化培养 将奶样均匀涂于新鲜制备的鲜血琼脂培养基和高盐甘露醇培养基上，37℃培养24h后，观察其菌落形态特征。在高盐甘露醇培养基上生长出较小的黄色菌落, 在鲜血琼脂则生长出灰白色、黄白色、金黄色等各种形态的菌落, 个别菌落呈边缘不整的绒毛状。其中出现金黄色葡萄球菌典型菌落, 即大而光滑、边缘整齐、湿润、中等程度隆起, 金黄色、浅黄色或灰白色圆形菌落。有的菌落呈β型溶血。挑取上述可疑菌落进一步鉴定菌株种属。 1.2.3 生化鉴定 按照杭州天和微生物试剂有限公司葡萄球菌属生化鉴定