耐盐及苯乙酸、甲基对硫磷降解基因工程菌构建.pdfVIP

卷 期 ! # 微 生 物 学 报 ’() *! 1( *# 年 月 $%% % !#$ %’()(*(+$ ,-$ +,-(./0 $%% !!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!! 耐盐及苯乙酸、甲基对硫磷降解基因工程菌的构建 刘 智 洪 青 徐剑宏 张国顺 李顺鹏 （南京农业大学生命科学学院农业部农业环境微生物工程重点开放实验室 南京 $%%9# ） 摘 要： （ ）是一株耐高盐浓度（ ， ）和降解苯乙酸的菌株， L !#$%$’ @A * 2M 1;N) (O ) AP7 质粒为 插入甲基对硫磷水解酶基因（ 基因）构建而成。采用 酶切，获得含 AQN9 %* + !,F ! 有完整 %* + 基因片段，克隆到广宿主质粒AR7$% 和A66S85NT$ 上，构建成质粒AR785U 和 A66S85U。通过三亲杂交，在辅助质粒ASR$% 的帮助下，将质粒AR785U 和A66S85U 转移到 L 中，得到的工程菌L8AR785U 和L8A66S85U 具有耐盐、降解苯乙酸和水解甲基对硫磷的功 能，其中 水解酶活性与亲本菌株甲基对硫磷降解菌（ ） 相 L8A66S85U -’./+$%$’ * /0,+ PVV8=! 当，而 水解酶活性要提高 倍左右。经过传代试验，证明了工程菌的稳定性。 L8AR785U 关键词：耐盐，苯乙酸，甲基对硫磷，降解，三亲杂交，工程菌 中图分类号： 文献标识码： 文章编号： （ ） WG2 4 %%%83$%9 $%% %#8%##!8%3 含盐废水是指含有高浓度溶解性无机盐的废水，包括生活废水和含盐工业废水，主要 ［］ 来源有海水应用于工农业生产和生活所带来的含盐废水 ，以及一些工业行业特别是化 ［］ 工行业排放大量的含盐量极高的含盐工业废水$ ，例如，苯乙酸生产污水中含盐量可达 $% M X $! M ，农药杀虫双生产污水（蒸胺段）含盐量可达3 M X ! M 。上述废水中一般还含 有大量的难降解或有毒有机物，包括顽抗性化合物（ ），如纤维素、石油、多聚 S/,;),?-0;C,/ 物等，和生物异源性物质（ ），如苯环类物质、农药（杀虫剂、除草剂）、卤代芳烃， Y/C(.?(-?,@ 多环芳烃等。这些物质有很多是致癌和致畸物质，且在环境中持久性长，如不经处理就排 放到环境中，将直接危害到陆生和水生生态系统，通过生物链的富集作用，积累在生物体 中，威胁人类健康。 生物处理是消除工业废水中有机污染物的最主要和最有效的方法之一，采用基因工 程的方法，将具有抗性的菌株和具有降解性状的菌株进行遗传重组，人为创造出既耐各种 逆境，又能高效降解有机污染物的基因工程菌，将是解决这类废水的一种行之有效的方 法。 近年来国内外许多研究人员都致力于环境微生物基因工程菌构建方面的研究，如 ［］