细胞及组分分离纯化和分析.pptVIP

* * 第三节 细胞及其组分的分离纯化和分析 流式细胞分选仪 4. 计算机系统：将收集的光信号转换成 数字信号再进行处理分析 数据显示： ①直方图：横标以道数表 示，代表所测荧光或散 射光强度纵标表示细胞 的相对数 优点：可定性，可定量 缺点：只能显示一个参 数于细胞之间的关系 ②二维图：横、纵标分别表示与细胞有关的两个独立参数，平面上的每个点表示同时具有相应坐标值的细胞存在。 优点：显示两个独立参数与细胞相对数 之间的关系，反应信息量大 缺点：细胞 点密集的地 方难以显示 它的精细结 构 ③ 二维等高图：等高图上每连续曲线代表具有相同细胞数的细胞群，即等高。曲线层次越高，代表的细胞数越多。 （二）、样品的制备 1.制备单个细胞悬液 分离不同类型的细胞后用蛋白水解酶（胰蛋白酶、胶原酶）消化细胞间结合物质或用金属离子螯合剂（乙二胺四乙酸 EDTA）除去细胞互相粘着所依赖的Ca2+，然后用轻微的机械方法即可制备成单个细胞悬液。 2. 细胞固定、染色 活细胞无需固定，死细胞用甲醛、乙醇、丙酮固定。流式细胞标本一般可不染色，但要观察细胞内特殊分子（如DNA，RNA）则需染色。 3. 细胞分选 流式细胞分选仪 二、细胞组分的分级分离 原理： 利用颗粒大小的不同