基因ARHI在胃癌MKN细胞株中抑癌作用及相关细胞信号传导通路探讨.pdfVIP

摘要 ARHI(Rasmember homolog I)是由YU等在1999年从人卵巢和乳腺上 皮细胞及其癌细胞中克隆并命名，定位于人染色体lp31，全长8kb，包含2个外 显子，一个内含子，编码26．KD的GTP结合蛋白。ARHI是一种单等位基因表 达和母源性印迹的基因，它在肿瘤细胞中表达异常从而抑制肿瘤细胞的生长、运 factor-K 动和侵袭。核转录因子(nuclear B淋巴细胞核抽提物中发现的一种结合于免疫球蛋白K轻链增强子上的核蛋白。 文献报道，NF．KB通过对相应基因的转录调节促进肿瘤的发生、肿瘤细胞的 B特别是RelA(P65)在胃癌中表达明显增强，且幽 增殖、侵袭和转移。NF．K 门螺杆菌(HP)感染可激活NF．KB，这表明NF．KB可能在HP感染到胃癌的 发生发展过程中起重要作用。而ARHI的表达异常可引起NF—KB上游的MAPK、 STAT3、P13K等信号通路异常，为了进一步明确肿瘤发病的分子机制，我们拟 研究胃癌MKN细胞中ARHI基因与NF．KB细胞信号传导通路之间的联系。因 此，本实验选取胃癌细胞株MKN、ARHI、NF．KB作为研究对象，使用药物嘌 B 呤霉素构建胃癌细胞株MKN的ARHI干扰模型，进一步探讨ARHI与NF．K 之间的相互关系以及在胃癌发生发展中的可能机制。 转293T细胞，以B—gal质粒为内参，根据荧光素酶反应测定NF．KB转录激活能 力。观察胃癌MKN细胞株siARHI模型中NF．KB磷酸化水平以及细胞核内NF． gB的变化情况，Westernblot法检测蛋白表达水平。结果表明，在293T细胞中 B的转录激活能力；MKN细胞株中干扰ARHI 过表达ARHI可以明显下调NF．K 使其表达减少可使NF．KB磷酸化水平及细胞核内NF．KB蛋白水平均明显上调。 由上述结果，我们发现，ARHI可以下调NF．KB的转录激活能力，且使NF．1cB B存在相互 的磷酸化降低从而减少入核。这些结论第一次证明了ARHI和NF．K 作用，不仅明确了ARHI的新功能，为ARHI的抑癌机制提供了重要线索，而且 为通过干预NF．r．B表达进行肿瘤治疗提供了一个新的靶点。 B；ARHI 关键词：胃癌；NF．K Abstract ARHI(Ras member homolog I)was firstidentified fromoⅥ洒an andbre嬲t callcers cell Yuat1999．The by ARHI toa gene locuson maps h啪aIl c111．omosoll圮 lP3 8kb l，spans approximately twoexol[1S containing and one‰n，encodesa26- kDa