条件性缺氧诱导因子-1α RNAi转基因小鼠模型建立.pdfVIP

生 物 工 程 学 报 Chin J Biotech 2008, January 25; 24(1): 27-32 Chinese Journal of Biotechnology ISSN 1000-3061 cjb@ ©2008 Institute of Microbiology, CAS CSM, All rights reserved. 研究报告 -1α RNAi † † 戚华兵 , 宋瑞华 , 杜晓兰, 赵 玲, 苏 楠, 刘道诚, 李福兵, 陈 林 , , 400042 : 缺氧诱导因子 1α (hypoxia inducible factor-1 α, HIF-1 α)是细胞在缺氧等条件下稳定表达的具有转录活性的蛋 白,通过与多种靶基因调控区的缺氧反应元件(hypoxia response element, HRE)结合, 调控靶基因表达, 使机体对缺氧、缺 血等病理生理过程产生适应性反应。为从整体动物水平研究 HIF-1 α 的作用, 需要建立 HIF-1 α相关遗传修饰小鼠。分 别针对HIF-1 α mRNA 序列的两个靶位点合成两对互补的寡核苷酸链, 构建可诱导的 RNA 干扰真核表达载体HIF-AB 和HIF-CD 。分别将CRE 重组酶真核表达载体CRE-ERT2 与HIF-AB 或HIF-CD 转染入RAW264.7 细胞, 筛选得到稳定 表达CRE-ERT2 与HIF-AB, 或CRE-ERT2 与HIF-CD 的稳定细胞系。在用4-HT 诱导去除上述细胞系中HIF-AB 或HIF-CD 所含的Neo 基因后, 用CoCl2 诱导HIF-1 α表达, 采用半定量RT-PCR 检测HIF-AB 或HIF-CD 对HIF-1 α 基因表达的影 响。结果发现干扰载体(HIF-AB 和HIF-CD)对 HIF-1 α mRNA 序列的沉默效果分别为 85%和72% 。选择干扰效率较高 的表达载体 HIF-AB 经显微注射获得 HIF-1 α基因敲低小鼠模型, 经 PCR 以及测序验证获得 2 个转基因阳性小鼠 (Founders, G0 代) 。G0 代雄鼠与FVB/N 雌鼠交配后获得2 只F1 代(first filial generation)转基因阳性小鼠, 经与EIIA-Cre 转基因小鼠交配, 得到EIIA-Cre; HIFRNAiflox/+ 小鼠, RT-PCR 结果显示, EIIA-Cre; HIFRNAiflox/+ 小鼠肝、肺、肾等组织的 HIF-1 α mRNA 水平明显降低, 分别约为正常对照的44% 、38.2%和23.5% 。该小鼠模型的建立为进一步研究HIF-1 α 的 功能及作用机制提供了新的手段。 : 缺氧诱导因子-1α, 发夹状小干涉 RNA, 转基因小鼠 Generation of Inducible HIF-1α RNAi Transgenic Mice † † Huabing Qi , Ruihua Song ,