份苜蓿种质材料与研究遗传多样性和亲缘关系分析.pdfVIP

16 份苜蓿种质材料的遗传多样性和亲缘关系分析 1，4 1，2 1 3 2 4 王照兰 ，杜建材 ，赵青山 ，卢欣石 ，李青丰 ，杨持 （1.中国农业科学院草原研究所，内蒙古呼和浩特 010010； 2. 内蒙古农业大学生态环境学 院, 内蒙古呼和浩特 010019； 3.北京林业大学； 4.内蒙古大学生命科学学院，内蒙古呼和 浩特 010021） 摘要：采用 RAPD 分析技术、单株取样方法，对 16 份苜蓿种质材料的遗传多样性和亲缘 关系进行了研究，结果表明：16 份苜蓿材料平均多态位点 57.63，平均多态位点百分率 75.82%。 由 Shannon 指数和 Nei 指数统计的材料总遗传多样性和总基因多样性分别为 0.5470 和 0.3718，材料内遗传多样性和材料内基因多样性分别为 0.3754 和 0.2675，由 Nei 指数估 算的材料遗传多样性比由 Shannon 指数估算的值为低。两种指数估算的材料间的遗传分化比 例基本相同，分别为 26.17%和 27.34%。聚类分析结果表明：16 份苜蓿种质材料可分为 4 个 类型组。材料聚类既体现了地理分布的集中性，也有来自不同地域的材料具有较高的一致性 的情况。 关键词 ：苜蓿；种质材料；遗传多样性；亲缘关系 随机扩增多态性 DNA （Random Amplified Polymorphic DNA ，简称 RAPD ）技术是用任意 的 10 个碱基的寡核苷酸片段作为单引物，用未知序列的基因组 DNA 为模板，通过 PCR 扩增 获得一组不连续的 DNA 片段，再通过电泳检测，可以揭示出这些片段的多态性[1,2] 。RAPD 技术的优点主要是操作相对简单、费用较低、无放射性、实验设备简单、实验周期短。因此， 近年来 RAPD 技术在遗传多样性研究中得到了极为广泛的应用。 目前，利用 RAPD 技术对苜蓿种质资源遗传多样性的研究已经有报道[3-7] 。Etch 等（ 1991 ） 对二倍体苜蓿的回交群体进行了 RAPD 分析，他们认为象苜蓿这样遗传信息了解的非常少或 某些遗传信息很难获得的种，利用 RAPD 标记可以较快地掌握部分遗传信息，这无疑对育种 和种质资源的鉴定具有重要意义。Kangfu Yu 等（ 1993 ）利用 RAPD 技术对几个苜蓿品种的 亲缘关系和品种的杂合性进行了分析，认为 RAPD 标记可为杂合群体间亲缘关系的分析和杂 交育种中为获得最大的杂交优势而合理选择亲本提供大量有用的遗传信息。由此可见，RAPD 技术在迅速获得遗传信息方面具有很高的利用价值。 我国苜蓿种质资源极为丰富，但对这些资源的遗传潜力及材料（品种）间的遗传差异了 解的太少。积极借鉴作物品种资源遗传多样性研究中应用的 RAPD 技术的成功 经验，深入分析研究我国苜蓿的遗传多样性及材料（品种）间的亲缘关系，对促进我国苜蓿 种质资源和育种研究具有重要意义。 1 材料和方法 1.1 材料 本论文只对经过形态特征、农艺性状、营养评价和种子储藏蛋白研究的综合性状较好的 和田间抗性较高的 16 份苜蓿材料进行了 RAPD 研究。秋季最后一次刈割后从再生枝条上摘取 健康、幼嫩的叶片置-20℃冰箱短期保存，用于提取 DNA。每品种各 11 个单株，共 176 个样 品。 1.2 方法 1.2.1 细胞总 DNA 的提取 1 总 DNA 提取采用了 CTAB 法。 1.2.2 总 DNA 含量的检测 1.2.2.1 电泳检测 取 3µl DNA 原液加入 7µl 三蒸水和 2µl 溴酚蓝，同 0.7%的琼脂糖凝胶电泳检测 DNA 浓度， 电压为 3V/cm。用 Lambda DNA/ECORI 作为标准分子量（Marker），在紫外检测仪上估测其浓 度及完整性。 1.2.2.2 紫外吸收检测 用紫外吸收检测 DNA 的浓度和纯度。吸取 5µl DNA 原液，加灭菌三蒸水至 2ml，混匀后 转入石英比色皿中。分光光度计用 2ml 水校正后，在 260n