湖南农业大学生物化学-02-核酸与研究结构与功能-03.pdfVIP

第第三三章章 核酸的结构与功能核酸的结构与功能 生物化学（第三版）辅导与 习题集（王镜岩《生物化学》 配套辅导） 戴余军 著 湖北辞书出版社湖北辞书出版社 2010 - 06 当当价：¥20.80 第三章第三章 核酸的结构与功能核酸的结构与功能 第一节 核酸通论 第二节 核酸基本构件单位—核苷酸 第三节第三节 DNA的分子结构的分子结构 第四节第四节 RNARNA的分子结构的分子结构 第五节第五节 核酸的某些理化核酸的某些理化性质性质 第六节核酸第六节核酸研究常用研究常用技术技术 第五节第五节 核酸的某些理化核酸的某些理化性质性质 一、核酸的水解 二、核酸的两性解离性质 三、核酸的紫外吸收（λmax=260nm） 四、核酸的变性、复性、增（减）色效应 五、核酸的熔解温度（Tm ） 一一、核酸的水解核酸的水解 核酸可被酸、碱或酶水解成为各种组分，其水解程度因水解条件而异，水 解产物可用层析、电泳等方法分离。 碱水解碱水解 RNA能被稀碱水解，在水解过程中，随着磷酸二酯键的断裂， 先生成先生成2’2’,3’3’-环核苷酸中间物环核苷酸中间物，，最后生成最后生成2’2’-核苷酸和核苷酸和3’3’-核苷酸核苷酸 的混合物。 DNADNA 由于不存在由于不存在22’--OHOH ，，对稀碱有一定抗性对稀碱有一定抗性 酸水解 在酸性条件下，磷酸酯键比糖苷键更稳定，其中稳定性最差的 是嘌呤与脱氧核糖之间的糖苷键。所以，若对核酸进行酸水解， 首先生成的是首先生成的是无嘌呤酸无嘌呤酸(apurinic acid ）。）。 核酸酶是指所有可以水解核酸的酶核酸酶是指所有可以水解核酸的酶。 依据底物不同分类依据底物不同分类 DNA酶((deoxyyribonuclease,, DNase))： 专一降解DNA 。 RNARNA酶酶 ((ribonucleaseribonuclease, RNaseRNase))：： 专一降解RNA。 依据切割部位不同依据切割部位不同 核酸内切酶核酸内切酶：：分为限制性核酸内切酶和非特异分为限制性核酸内切酶和非特异 性限制性核酸内切酶。 核酸外切酶核酸外切酶：：55´→33 ´或或33 ´→55´核酸外切酶核酸外切酶。。 RNaseRNase 实验室常用的实验室常用的RNaseRNase有两种有两种，，其一是其一是牛胰核糖核牛胰核糖核 酸酶(pancreatic ribonuclease) ，又称RNase I或RNase AA ，，是一种专一性内切酶是一种专一性内切酶，，水解产物为水解产物为33-嘧啶核苷酸嘧啶核苷酸，， 和以3-嘧啶核苷酸结尾的寡核苷酸。 其二是其二是核糖核酸酶核糖核酸酶T1T1((ribonucleaseribonuclease T1T1)) ，，水解产水解产 物为3-鸟嘌呤核苷酸，和以3-鸟嘌呤核苷酸结尾的寡 核苷酸核苷酸。。 DNaseDNase 实验室常用的DNase有牛胰脱氧核糖核酸酶 (DNase I, pancreatic deoxyribonuclease) ，可以将单链 或双链或双链DNA水解为平均长度为水解为平均长度为4个核苷酸的个核苷酸的，，以以5-磷酸磷酸 为末端的寡聚核苷酸。 牛脾脱氧核糖核酸酶牛脾脱氧核糖核酸酶(DNase II, spleen deoxyribonuclease) ，可以将单链或双链DNA水解为平 均长度为均长度为6个核苷酸的个核苷酸的，，以以3-磷酸为末端的寡聚核苷酸磷酸为末端的寡聚核苷酸。。 核酸的核酸的一般理化性质一般理化性质 1.核酸为两性电解质，通常表现为酸性。 2.DNA2.DNA为白色纤维状固体为白色纤维状固体，，RNARNA为白色粉末为白色粉末，，不溶不溶 于有机溶剂。 3.DNA溶液的粘度极高，而RNA溶液要小得多。 4.RNA4.RNA能在室温条件下被稀碱水解而能在室温条件下被稀碱水解而DNADNA对碱稳定对碱稳定。。 55. 沉降行为沉降