3种致病性弧菌选择性鉴别培养基的研制.pdf

12IIoII7IIoII 14If!!141il 3种致病性弧菌选择性鉴别培养基的研制!IYIIII l粤 摘要 水产品是人类赖以生存的基础物质和重要蛋白来源，深得消费者 的喜爱，消费量也在日益提高。致病性弧菌是水产品中引发人体疾病 的主要致病菌，会引发人的季节性传播流行性的肠道疾病，导致人类 发生严重的腹泻等消化道疾病或创伤感染病变、创伤感染或发生败血 症，甚至死亡。研究和建立致病性弧菌快速检测的新技术和新方法受 到各国研究机构的重视。用选择性鉴别培养基即可满足抽检率，更真 实的反应水产品的污染状况，又能克服标准方法的费时、繁琐和成本 较高等许多不足。 本论文主要围绕以下几个方面开展了一些工作： 1霍利斯弧菌选择性鉴别培养基的研制 基于霍利斯弧菌的基础营养和特殊生态环境需求，优化了其增菌 培养基及培养条件。通过单因素试验结合响应面组合试验得到如下结 果：培养基组成成分为混合蛋白胨2．11％(胰蛋白胨：鱼蛋白胨为1：1)、 酵母浸膏0．210％、NaCI 7．5；培养温度为36土1℃。经过8h 2．13％、pH 增菌后，该培养基的菌液浓度是GB／T4789．7．2008中规定方法的碱性蛋 白胨水(APW)增菌菌液浓度的1．39倍，增菌效果明显。 以霍利斯弧菌特有的酶系统及其代谢特点和对某些特定抑菌成分 的抵抗力为基础，设计研制了霍利斯弧菌选择性鉴别培养基(VhDM)。 试验中对VhDM的显色效果、平板效率、灵敏度和特异性进行评价。结 果显示：VhDM对霍利斯弧菌具有较好的选择性和特异性；用VhDM在 h~24 36-4-1℃培养16 h，霍利斯弧菌菌落为黄色；其它各种弧菌及非弧 菌属致病菌菌落呈红色或未形成有效的可见菌落；VhDM对霍利斯弧菌 cfu／mL； 的出菌效率与嗜盐琼脂相比为(90．65±1．72)％；检出限为101 因此，VhDM对海产品中霍利斯弧菌分离鉴别与检测是可行的，且具有 操作简便、经济、结果易于观察等优点。 2河弧菌选择性鉴别培养基的研制 基于河弧菌的基础营养和特殊生态环境需求，优化了其增菌培养 基及培养条件。通过单因素试验结合响应面组合试验得到如下结果： 培养基组成成分为混合蛋白胨2．24％(胰蛋白胨：鱼蛋白胨为1：3)、酵 4-1℃。经过8h 母浸膏0．204％、NaCl 8．0；培养温度为36 1．81％、pH 白胨水(APw)增菌菌液浓度的1．59倍，增菌效果明显。 以河弧菌特有的酶系统及其代谢特点和对某些特定抑菌成分的抵 抗力为基础，设计研制了河弧茵选择性鉴别培养基(VfDM)。试验中对 VfDM的显色效果、平板效率、灵敏度和特异性进行评价。结果显示： VfDM对河弧菌具有较好的选择性和特异性；用VfDM在364-1℃培养 18h～24 h，河弧菌菌落为深褐色；其它各种弧菌及非弧菌属致病菌菌 落呈红色或未形成有效的可见菌落；VfDM对河弧菌的出菌效率与嗜盐 cfu／mL；因此，VfDM对海产 琼脂相比为(92．80+2．88】％；检出限为101 品中河弧菌分离鉴别与检测是可行的，且具有操作简便、经济、结果 易于观察等优点。 3弗尼斯弧菌选择性鉴别培养基的研制 基于弗尼斯弧菌的基础营养和特殊生态环境需求，优化了其增菌 培养基及培养条件。通过单因素试验结合响应面组合试验得到如下结 果：培养基组成成分为混合蛋白胨2．08％(胰蛋白胨：鱼蛋白胨为1：3)、 4-1℃。经过 酵母浸膏0．221％、NaCl 8．5；培养温度为36 1．94％、pH 蛋白胨水(APW)增菌菌