肾上腺素受体基因在毕赤酵母中的表达及活性测定.pdfVIP

中国生物工程杂志　ＣｈｉｎａＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，２００８，２８（８）：１８～２２ β 肾上腺素受体基因在毕赤酵母中 ２ 的表达及活性测定 １ １ ２ ２ ２ ２ ２ 黄园园　沈　红 　王　迪 　于洪侠 　孙丰梅 　杨啸枫 　杨曙明 （１北京农学院　北京　１０２２０６　２中国农业科学院饲料中心　北京　１０００８１） 摘要　为提高 肾上腺素受体（ ＡＲ）表达量，满足生产需求，使其应用到抗体技术上，利用分 β β ２ ２ 子克隆技术将 肾上腺素受体基因（ ＡＲ）与绿色荧光蛋白基因（ｅＧＦＰ）克隆到毕赤酵母（Ｐｉｃｈｉａ β β ２ ２ ｐａｓｔｏｒｉｓ）表达载体中。表达载体ｐＰＩＣＺＤＮＡｓＧＦＰ转化至酵母后，ＡＲ和ｅＧＦＰ基因与酵母基因 α β ２ １２５ 重组。利用筛选出的阳性重组子诱导表达 ＡＲ和ｅＧＦＰ的融合蛋白，通过 Ｉ标记的配体结合实 β ２ 验证明获得了有受体活性的融合蛋白。 关键词　 肾上腺素受体　ｅＧＦＰ　毕赤酵母表达系统　ｐＰＩＣＺＡ　 激动剂 β α β ２ ２ 中图分类号　Ｑ７８６ 　　 肾上腺素受体激动剂作为饲料添加剂能随饲料 在胞内形成包涵体，使蛋白具有很好的活性。研究表 β ２ 残留于动物组织中，并通过食物链蓄积于人体，危害人 明甲醇毕赤酵母表达系统可以提高表达量［７，８］。ＧＦＰ 类健康，严重者可以致死，因此世界上大多数国家都禁 的检测具有不需要添加任何底物或辅助因子，不使用 ［１］ 止该药物作为饲料添加剂 。然而，因经济利益的驱 同位素，也不需要测定酶的活性等优点；同时，ＧＦＰ对 使，尤其在我国，违法滥用屡禁不止，并且新的同类药 ［９］ 细胞没有毒害作用，不影响细胞的正常生长和功能 ， 物不断出现，现有的检测技术远不能满足需要，迫切需 所以，利用ＧＦＰ作为选择标记基因，可以很方便地从大 要一次性多残留检测技术。随着对 β激动剂作用机 量的细胞或组织中筛选出转化细胞及植株，并且可用 ２ 理分子水平的深入研究，发现 肾上腺素受体对所有 来追踪外源基因的分离情况。 β ２ 已知和未知的肾上腺素都有亲和性，因此以受体为检 ［２］ １　材料与方法 测试剂能克服现有检测方法的诸多弊端 。但是，受 体的表达量依然是技术难题。 １．１　材　料 １．１．