PFOSK 和APFO 对斑马鱼胚胎急性毒性评价.docVIP

PFOSK和APFO对斑马鱼胚胎的急性毒性评价 Acute Toxicity Evaluation of PFOSK and APFO to Zebrafish Embryos 丁光辉1，*，1，1 (1大连海事大学环境科学与工程学院，大连，116026；2116600；*联系人，E-mail：dong_yuying@163.com)(1College of Environmental Science and Engineering, Dalian Maritime University, Dalian, 116026； 2Department of Environmental Engineering, Dalian Nationalities University, Dalian, 116600） 引言 Perfluorooctane Sulfonate，PFOS）和全氟辛酸（Perfluorooctanoic acid，PFOA)是两种最为典型的全氟化合物（Perfluorinated compounds，PFCs）。由于全球环境中广泛分布、难以降解且具有多种潜在的毒性效应，近年来备受关注，成为环境科学和毒理学领域中一个前沿课题和研究热点。材料与方法 2.1实验生物 4~5月龄的斑马鱼购于大连市香炉礁花鸟鱼虫市场，体长4~5 cm。在实验室驯养1个月后用于鱼卵的采集。饲养用水为活性炭过滤，且曝气24 h以上的自来水，氧饱和度80%；水中pH值控制在7.5~8.5之间；温度控制为26.0 ± 1 °C；光照/黑暗比为14: 10。每日喂食卤虫和颗粒食料2次。实验前一天傍晚，挑选体长相近的雌雄斑马鱼（鱼数比1: 2）置于自制的鱼卵收集器中。第二天早上给光30分钟后采集斑马鱼胚胎用于急性毒性实验。 2.2试剂和仪器 Potassium perfluorooctane sulfonate (PFOSK, CAS: 2795-39-3)和Ammonium perfluorooctanoate (APFO, CAS: 3825-26-1)购于Sigma-Aldrich公司。应用标准稀释水分别配成1 mM PFOSK和5 mM APFO的储备液。 应用聚丙烯的24孔细胞培养板进行毒性实验。实验中采用leica体视显微镜和倒置显微镜进行受精卵的筛选和发育状态观察。pH计、溶解氧仪和电导率仪用于实验中pH值、溶解氧及电导率的监测。 2.3 斑马鱼胚胎毒性实验 收集的受精卵用标准稀释水清洗三次后，分配到不同浓度的受试溶液中，以保证胚胎同时暴露不同浓度的受试液。然后把胚胎在体视显微镜下分拣入24孔板，每孔含2 mL的受试液。每种化合物设置5个浓度梯度，每个处理浓度暴露20个胚胎和4个板内空白对照，同时设置24个外部空白对照。细胞培养板放置于温度26.0 ± 1 °C，光照/黑暗比为14: 10的培养箱中。每24 h更换1次受试溶液。在倒置显微镜下观察胚胎发育情况，拍照并记录。观测指标包括致死率和发育形态得分值。GraphPad Prism v4.0中的非线性拟合用于LC50和EC50的计算。 结果与讨论3.1 PFOSK和APFO对斑马鱼胚胎的致死效应 图1 PFOSK和APFO对斑马鱼胚胎的致死效应 随着暴露时间的延长，LC50值逐渐降低。PFOSK和APFO在72 h时的LC50值分别为0.13 mM和1.79 mM，而96 h时的LC50值分别为0.08 mM和1.47 mM。 3.2 PFOSK和APFO对斑马鱼胚胎形态发育的影响 图2 PFOSK和APFO对斑马鱼胚胎形态发育的影响 根据斑马鱼在24 h，48 h，72 h和96 h时间点形态发育特征，确定了相应的得分评价标准。由不同暴露浓度下形态发育得分值，计算出相应的EC50值。EC50值同样呈现随着暴露时间的延长，逐渐降低的趋势。PFOSK和APFO在72 h时的LC50值分别为0.12 mM和1.82 mM，而96 h时的LC50值分别为0.08 mM和1.50 mM。由于形态发育得分中包含致死效应的相关信息，因此所得的LC50和EC50值较为相近。但是，形态发育得分指标包含较多的形态发育的相关信息，能更好地区分不同时间节点时化合物的毒性效应。 4．结论致谢 本工作受基本科研业务费2011QN053）和国家自然科学基金资助参考文献方雪梅, 王建设, 戴家银.全氟类有机污染物的污染状况及其生态毒理研究进展. 地球科学进展. 2010 25: 543–551. 韩建, 方展强. 2010. 水环境PFOS和PFOA的污染现状及毒理效应研究进展. 水生态学杂志 3: 99–105. Hermsen S.A.B., van den Brandhof E.-J., v