EBNA-1的功能特点与基因治疗.pdf

维普资讯 中山大学研究生学刊 (自然科学、医学版) 第28卷第4期 JOURNALOFTHEGRADUATES VOL．28No4 2007 SUNYAT—SENUNIVERSITY (NATURALSCIENCES、MEDICINE) 2007 EBNA一1的功能特点与基因治疗 何玉文 ¨，陈宏远 ，杜军 (1．中山大学药学院微生物与生化制药研究室广州 510080； 2．重庆大学生物工程学院，国家教育部生物力学与组织工程重点实验室，重庆400044) 摘 要 ：EB病毒 (EBV)与多种恶性肿瘤的发生、发展密切相关。EBNA一1 是EBV潜伏感染时编码的一种核蛋 白，它能调节EBV基因的复制，增强病毒 基因的转录，并能保证 EBV 以附加体的形式稳定存在于被感染的细胞 内。利 用此蛋 白上述两种功能特点，研究者构建了EBV复制子载体，这种载体 已被 广泛地应用于基 因治疗。 关键词：EB病毒；EBV核蛋白1；EBV复制子载体；基因治疗 EBV属疱疹病毒科，是嗜淋巴细胞病毒，可引起传染性单核细胞增多症，多种恶性 肿瘤，如鼻咽癌、胃癌、乳腺癌、Hodgkin’S病及 Burkitt’S淋巴瘤都和它相关。鼻咽癌是 我 国华南地区高发的一种恶性肿瘤 ，国外研究甚少，我 国在这方面的研究也是刚刚起 步。临床检验发现，几乎所有鼻咽癌病人的癌组织中都存在EBV基因组，病人的血清 中存在高效价EBV抗原的IgG和 IgA抗体，并且 LMP1已被证实是EBV编码的具有癌 基因编码蛋 白特性的产物，这些依据充分显示了EBV与鼻咽癌发病的相关性，因此对 EBV的研究具有显著的现实意义 。 EBV在感染的细胞 内主要有两种存在形式：裂解感染和潜伏感染。裂解期感染时， 病毒进行完整的基因复制、转录、翻译和病毒装配过程，导致细胞裂解；潜伏感染时， 病毒基因在细胞内的存在方式也有两种，一种是以附加体的形式存在；一种是以线形 DNA整合到宿主细胞染色体中。在病毒以附加体的形式存在的细胞中，病毒基因每个 细胞周期复制一次，并向子细胞传递，从而保证了细胞中病毒基因的持续存在。而EB— NA一1在病毒维持附加体的过程中起到关键 1性作用，它与细胞 内因子共同调节病毒基 因与染色体的结合及分离。其中，orip是EBNA一1的主要作用位点¨，它由两部分组 成：重复序列家族 (FR)和双向对称区 (Ds)。FR是复制的增强子，也具有转录增强 的功能，Ds是EBV的复制起始点。在EBNA一1的作用过程中，它结合于orip，EBNA一1 彼此之间也相互连接 ，同时在细胞内因子的辅助下，结果使 DNA成环，有利于EBV 复制和转录复合体的形成。所以EBNA一1主要维持了含有orip基因的稳定存在，研究者 对它的这种功能特点进行了深入的研究，进一步证明了EBV能在 B细胞中稳定存在的 收稿 日期：2007一l1—09 维普资讯 《研究生学刊》(自然科学 、医学版) 二OO七年第四期 机理，发现它在基因治疗中的应用具有远大的发展前景。 1 EBNA一1和 ORIP的分子生物学特性 EBNA．1是一种 EBVBamHIK基因编码 的核蛋 白。在 B95—8细胞系中这种蛋 白由 641个氨基酸组成，分为四个区域，依次排列为：EBNA一1连接区 1(LR1)、甘氨酸 一 甘氨酸一丙氨酸重复序列区、连接区2(LR2)、DNA结合区。EBNA．1的羧基端为DNA 结合区，其中第451—608位氨基酸为亲水性结构域，具有序列特异性的单链和双链 DNA结合及二聚化等活性，其功能与牛乳头状瘤病毒E2蛋 白的功能相似。Ambinder等 人用EBNA一1的第450—641位氨基酸和核定位信号区重组的复合物C—myc去激活FR复 合体，发现DNA结合区是 EBNA．1的主要功能单位。若 DNA结合区改变，会引起EB— NA．1在复制和转录中的功能改变，而单独的这段 DNA结合区不能支持复制和转录，相 反它与DNA结合会抑制野生型EBNA．1的功能 。 1 40 89 328 377 451