慢性牙髓炎及慢性根尖周炎中P.n.与P.i.的实时荧光定量PCR检测.pdfVIP

山东大学硕士生学位论文 慢性牙髓炎及慢性根尖周炎中砌与用的 实时荧光定量PCR检测 专业：口腔临床医学 研究生：钱华 导师：亓庆国副教授 中文摘要 牙髓病及根尖周病是以厌氧菌为主的混合感染，普式菌属为革兰氏阴性厌氧 intermedia， 杆菌，在感染根管样本中的检出率较高。中间普沃雷菌(Prevotella P．L)与变黑普沃雷菌(Prevotella nigrescens，Pn．)在感染根管中的检出率较 高，有时为最高。传统的培养方法获得的细菌种类与数目远低于实际水平，而目 前大部分的分子生物学技术只能用于口腔致病菌的定性研究。荧光定量PCR可 实现对DNA模板的定量，具有灵敏度高、特异性和可靠性强等优点。而且根尖 周炎主要继发于牙髓的细菌感染。细菌在根管内的定植与为一动态过程，感染持 续时间将影响细菌在根管内的定植。 Green 本实验拟用SYBR l模式的实时PCR技术，针对细菌基因组中的 16SrDNA，对慢性牙髓炎及慢性根尖周炎中的中间普沃雷茵(P￡)、变黑普沃雷 菌(Pn．)及总细菌进行定量检测，比较在慢性牙髓炎及慢性根尖周炎中，两种 细菌及总细菌的数量的差异，初步明确这两种细菌及总细菌在根管感染的不同时 期其数量是否发生变化，有助于人们更加明确牙髓病及根尖周病的病因，并为抗 生素的指导应用提供一定的依据。 Green 方法：应用SYBR I模式的实时荧光定量PCR技术检测20例慢性牙 髓炎及20例慢性根尖周炎中Pi．及P刀．的检出率与检出数量及其在总细菌中所占 的比例，比较两种疾病中Pt及Pn．定植情况的差异。每组数据之间的差异用SPSS 16．0进行统计学分析。 X 结果：慢性牙髓炎中，总细菌16SrDNA扩增子检出数目为1．3432 X X 104。3．4l 102--4．8067102， 12×106，检出率为100％；P．i．的检出数目介于1．3198 山东大学硕士生学位论文 ％。 X X 1021．2841103，占总细菌 ×106，，检出率为100％；P￡的检出数目为2．4051 ×103，检出率为30％，占总细菌的比例为0．0401％加．122％。 总细菌中只儿所占比例在慢性牙髓炎和慢性根尖周炎中的差异具有统计学意 义(PO．05)，总细菌中P．n．所占比例在慢性牙髓炎比在慢性根尖周炎中高。 结论：从数量上而言，两种细菌在慢性牙髓炎及慢性根尖周炎中并不是绝对 的致病菌。总细菌中P．n．所占比例在慢性牙髓炎比在慢性根尖周炎中高，提示随 着时间的变化，P儿在感染根管中的定植情况发生了改变。 关键词：中间普沃雷菌；变黑普沃雷菌；实时荧光定量PCR：慢性牙髓炎； 慢性根尖周炎 2 山东大学硕士生学位论文 英文摘要 ABSTRACT DetectionofP．／．